人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株ASPC-1/GEM
產(chǎn)品類別：人源細(xì)胞系
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM（高糖）+10%FBS+GEM
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
凍存條件：無血清細(xì)胞凍存液
細(xì)胞介紹
一個胰腺癌病人的腹水中的細(xì)胞移植到裸鼠后建立了這個細(xì)胞株。
注：本培養(yǎng)基是不直接添加吉西他濱藥物的。如果客戶需要直接添加的我們可以按照客戶的意愿添加吉西他濱藥物。
細(xì)胞特性
1） 來源：ASPC-1耐藥篩選
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1×106 細(xì)胞數(shù)
4） 用途：僅供科研使用
細(xì)胞運輸、保存及注意事項
復(fù)蘇細(xì)胞 凍存細(xì)胞
包裝 充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 1mL凍存管
運輸條件 常溫 干冰
保存方式 75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱 -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮/立即復(fù)蘇
注意事項 1. 收到細(xì)胞請先就培養(yǎng)瓶/凍存管的外觀、細(xì)胞的狀態(tài)，進行拍照并保存，如有問題請及時聯(lián)系我們；
2. 收到的復(fù)蘇細(xì)胞，若有較多細(xì)胞飄起，可能由于運輸導(dǎo)致。請先置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2~4h，待細(xì)胞貼壁后再做處理；
3. 復(fù)蘇細(xì)胞充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基，收到細(xì)胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基；
4. 建議收到細(xì)胞后，首先進行擴增，并凍存部分細(xì)胞以備用。
細(xì)胞耐藥誘導(dǎo)過程
待細(xì)胞生長穩(wěn)定后，開始倍增藥物誘導(dǎo)劑量，每個劑量保持至細(xì)胞可以穩(wěn)定生長至匯合度達50%以上。遞增藥物濃度依次為：0.03μg/mL、0.3μg/mL、1.5μg/mL、3μg/mL、6μg/mL、12μg/mL、18μg/mL。約10個月后，細(xì)胞可在18μg/mL GEM藥物濃度下穩(wěn)定生長，視為耐藥細(xì)胞株構(gòu)建成功，并命名為ASPC-1/GEM。
細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制
1）GEM藥物的配制及保存
建議將GEM藥物配制成18mg/mL的母液：即使用1mL DMSO溶液溶解18mg GEM藥物，使其完全溶解。
注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的GEM，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。
2）凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3）完全培養(yǎng)基的配制
成分 體積/濃度
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%
雙抗 1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%
GEM 0~18μg/mL
DMEM培養(yǎng)基 補充至所需體積
細(xì)胞培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%；溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。
細(xì)胞處理
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，2~3day換液。
①細(xì)胞復(fù)蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞完全貼壁，形態(tài)完全展開，生長狀態(tài)穩(wěn)定后，方可根據(jù)實驗需要添加GEM藥物。若加藥后細(xì)胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低GEM的濃度，或使用不含GEM的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的GEM濃度；
②建議復(fù)蘇細(xì)胞時始終穿戴防護手套和面罩，避免凍存管因溫差較大而發(fā)生爆炸，造成人員傷害。
2）細(xì)胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）
①待細(xì)胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。
②棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1次，吸凈殘余的PBS。
③加入適當(dāng)體積的0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶-1mL，其它培養(yǎng)器皿可覆蓋培養(yǎng)底面即可），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細(xì)胞細(xì)胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。
④將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，2~3day換液。
注意：細(xì)胞傳代過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞完全貼壁，形態(tài)完全展開，生長狀態(tài)穩(wěn)定后，方可根據(jù)實驗需要添加GEM藥物。若加藥后細(xì)胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低GEM的濃度，或使用不含GEM的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的GEM濃度。
3）細(xì)胞凍存
①細(xì)胞凍存時，步驟同2）細(xì)胞傳代的①~④，細(xì)胞計數(shù)后，加入配制好的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，按照1×106 ~ 1×107個細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
②將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
