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卡介苗（BCG）DNA 國家參考品National reference for BCG DNA 
【性狀】凍干粉
【用途】本參考品從我國卡介苗生產(chǎn)用工作種子批上海株 D2-甲 12（2）培養(yǎng)的菌體中提取，經(jīng)多重聚合酶鏈反應（mPCR）檢測卡介菌特異性缺失區(qū) RD1，鑒定為卡介菌 DNA，并經(jīng)國內(nèi)有關單位復核驗證。供卡介菌菌株、卡介菌核酸類制品鑒別實驗用定性參考品。
【包裝】安瓿瓶
【規(guī)格】3 μg/支
【使用方法和要求】
1、使用方法取本參考品 1 支，加入滅菌超純水 200 μL 復溶，靜置 2-3 min待用。
采用 ET1（5'-AAGCGGTTGCCGCCGACCGACC-3'）、ET2（5'-CTGGCTATATTCCTGGGCCCGG-3'）、ET3（5'-GAGGCGATCTGGCGGTTTGGGG-3'）三條引物，分別以滅菌超純水稀釋至終濃度為 10 μM。取參考品溶液 5 μL，加至 45 μL 反應試劑中【10 倍 PCR 緩沖液（pH8.3 100 mM Tris-HCl，500 mM KCl，15 mMMgCl2）5 μL、dNTP Mixture 2 μL、5 U/μL Taq 酶 0.3 μL、2 μL引物 ET1、4 μL 引物 ET2、2 μL 引物 ET3，滅菌超純水 29.7 μL】，共 50 μL 反應體系。
反應體系于 94℃預變性 10 min，然后 94℃變性 1 min、64℃退火 1 min、72℃延伸 30 s，循環(huán) 30 次后，72℃再延伸 7 min。取 PCR產(chǎn)物 10 μL 加 6 倍上樣緩沖液（配方：1、吸取 2 mL EDTA（500 mMpH 8.0）加入約 40 mL 雙蒸水；2、再稱量 250 mg 溴酚藍；3、量取50 mL 丙三醇；4、定容至 100 mL，4 度保存）2 μL 混勻，上樣于
3%的瓊脂糖凝膠泳道，分子量標記物（50 bp DNA ladder ）直接上樣 6 μL。于 100 mA 電泳 50 min。根據(jù)凝膠成像結果，以 50 bp DNAladder 為分子量標記，觀察參考品 PCR 擴增片段分子量大小。
2、判定標準
參考品擴增片段為約 200 bp（測序為 193 bp）的核酸片段，供試品與參考品的擴增條帶長度一致。結果判斷模式圖如下：
S S 

注：S 為本參考品，M 為分子量標記
【儲藏條件】2-8℃。復溶后-20℃保存，避免反復凍融。
【有效期】國家藥品標準物質不設具體有效期，按照規(guī)定條件保存的標準物質，在中國食品藥品檢定研究院發(fā)布停用通知前有效。
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