中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) 沙土管保藏法先將待保藏菌種接種于斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后制成孢子懸液，將孢子懸液滴入已滅菌的沙土管中，孢子即吸附在沙子上，將沙土管置于真空干燥器中，吸干沙土管中的水分，經(jīng)密封后置于4°C冰箱中保藏。此法利用干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)、低溫等因素綜合抑制微生物生長(zhǎng)繁殖，從而延長(zhǎng)保藏時(shí)間。
一、適用范圍
本方法適用于產(chǎn)孢子類放線菌、芽孢桿菌、曲霉屬、青霉屬及少數(shù)酵母，如隱球菌酵母和紅酵母等，保藏時(shí)間約為2-10年不等。但該法應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞則效果不佳，不適用于病原性真菌的保藏，特別是不適于以菌絲發(fā)育為主的真菌的保藏。
二、保藏方法
1、沙土管的制備
（1）取河沙加入10%稀鹽酸，浸泡24h（或加熱煮沸30分鐘），以去除其中的有機(jī)質(zhì)。如河沙中有機(jī)質(zhì)較多，可用20%鹽酸。
（2）倒去酸水，用自來(lái)水浸泡并沖洗至中性。
（3）烘干，用40目篩子過(guò)篩，以去掉粗顆粒，備用。
（4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。
（5）烘干，碾碎，通過(guò)100目篩子過(guò)篩，以去除粗顆粒。
（6）按沙:土=2:1或3:1的比例（也可根據(jù)需要用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，分裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，滅菌，烘干。
（7）抽樣進(jìn)行無(wú)菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)48小時(shí)，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無(wú)菌試驗(yàn)，直至證明無(wú)菌，方可備用。
2、菌懸液的制備
（1）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長(zhǎng)豐滿的，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞用此法效果不好）優(yōu)良菌種，向斜面培養(yǎng)物中加入3-5ml無(wú)菌水，洗下細(xì)胞或孢子，制成懸液。
（2）于每支沙土管中加入約0.2-0.5ml（一般以剛剛使沙土潤(rùn)濕為宜）懸液，拌勻。
（3）放線菌和霉菌可直接挑聚孢子拌入沙土管中。
3、干燥
將拌勻的沙土管放入真空干燥器內(nèi)，用真空泵抽干水分，抽干時(shí)間越短越好，盡量在12小時(shí)內(nèi)抽干。
4、菌種檢查
（1）每10支抽取一支，無(wú)菌條件下用接種環(huán)取出少量沙土粒，接種于斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況和有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。
（2）如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長(zhǎng)，則說(shuō)明制備的沙土管不合格，需重新制備。
（3）若經(jīng)檢查沒(méi)有問(wèn)題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。用此方法，通?？梢员２?-10年時(shí)間不等。
5、復(fù)蘇
需要使用菌種復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，在無(wú)菌條件下打開(kāi)沙土管，取沙土少許移入適宜的培養(yǎng)基內(nèi)，置適宜的條件下培養(yǎng)。