細(xì)胞介紹
K562/ADR為由K562細(xì)胞構(gòu)建的耐ADR藥物細(xì)胞株。
細(xì)胞特性
1)來源:人慢性髓系白血病細(xì)胞耐藥篩選 2)形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣;圓形,懸浮生長
3)含量:>1×106 細(xì)胞數(shù) 4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
細(xì)胞運輸、保存及注意事項
復(fù)蘇細(xì)胞 凍存細(xì)胞
包裝 充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 1mL凍存管
運輸條件 常溫 干冰
保存方式 37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱 -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或立即復(fù)蘇
※注意事項 1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞有污染;或凍存管有破損,融化、漏液等,請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀,顯微鏡下細(xì)胞照片(100倍,200倍各2張);2. 復(fù)蘇細(xì)胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基,血清濃度較低,收到細(xì)胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基;3. 建議收到細(xì)胞后,首先進(jìn)行擴(kuò)增(至少3代),并凍存部分細(xì)胞以備用。4. 初次培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)8×105個/mL時,可加入500ng/mL ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞細(xì)胞密度達(dá)1×106個/mL后傳代。細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖,即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng);若此過程中細(xì)胞停止增殖,且狀態(tài)較差,則需降低藥物濃度(首次降低一半藥物濃度)或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度達(dá)8×105個/mL,且生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的ADR藥物濃度。5. 細(xì)胞凍存過程中,不可添加藥物。
細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制
1)ADR藥物的配制及保存
建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液,即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物,使其完全溶解后,使用0.22um濾器過濾除菌。
注意:可根據(jù)用量配置藥物,并將藥物分裝保存,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的ADR,4℃保存1周,-20℃保存1個月,-80℃保存6個月。
2)凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。(凍存液中不含藥物)
3)完全培養(yǎng)基的配制
成分 體積/濃度
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%
雙抗 1%
1ug/mL ADR 0.1%母液(1mg/mL)
RPMI-1640培養(yǎng)基 補(bǔ)充至所需體積
細(xì)胞培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。