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菌種培養(yǎng)及打管說明
admin / 2015-01-05 08:42:20

安瓿瓶?jī)龈晒艽蚬苷f明
 
一、打管說明
1、安瓿瓶開封:用浸過75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng):用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴入安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液,移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中,并在建議的條件下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng):菌種活化前,請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下,某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,延遲期較長(zhǎng),需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)。
4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。
5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。
特別注意事項(xiàng)
l、微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔和干燥的地方,室溫放置時(shí)問過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退;
2、菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行,防止雜菌污染:
3、斜面菌種保藏時(shí)間通常為1-2個(gè)月,應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接;凍干菌種保藏時(shí)間通常為5~10年;
4、菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降,應(yīng)及時(shí)與微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系或更換新的菌種。

 西林瓶和甘油凍存管打管說明
 
二、西林瓶菌種打管復(fù)活操作步驟
1、用 75%酒精棉擦拭西林瓶表面進(jìn)行消毒。 
2、在生物安全柜中打開鋁制瓶蓋和膠蓋。 
3、用無菌吸管吸取 0.5ml 左右液體培養(yǎng)基(《菌種說明書》中固體培養(yǎng)基去掉瓊脂即可)于西 林瓶中將凍干菌粉全部溶解。 
4、將溶解后的菌懸液轉(zhuǎn)移至盛有 4~5mL 液體培養(yǎng)基的試管中混勻,可將殘留在吸管中的 1-2 滴菌懸液轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基上。
5、將液體試管和斜面試管于推薦條件下靜置培養(yǎng),以液體培養(yǎng)結(jié)果為準(zhǔn)。
三、甘油凍存管菌種打管復(fù)活操作步驟 
1、準(zhǔn)備好推薦的菌種培養(yǎng)基(見《菌種說明書》)。

2、將凍存管下半部浸入 37℃溫水中輕輕搖動(dòng),使冷凍狀態(tài)的菌種懸液迅速融化。如果收到菌種凍存管時(shí)菌懸液是融化狀態(tài)則需要立即進(jìn)行轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。 

3、用 75%酒精棉擦拭凍存管表面進(jìn)行消毒。

4、在生物安全柜中打開凍存管瓶蓋,用無菌吸管吸取全部菌懸液,均勻涂布到 2 支試管斜面 或平板上。 
5、將斜面試管或平板于推薦條件下靜置培養(yǎng)。對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的菌種應(yīng)持續(xù)培養(yǎng) 2 周至更長(zhǎng)的 時(shí)間。
四、注意事項(xiàng) 
1、 所有打管操作都需要無菌操作。需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行,生物危 害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作。 
2、 西林瓶和凍存管打開后需一次用完,不能留存。 
3、 菌種經(jīng)過凍干保藏后,處于休眠狀態(tài),需要轉(zhuǎn)接 2-3 代恢復(fù)活力。
4、 大部分凍干菌種會(huì)在培養(yǎng)幾天后生長(zhǎng)。有些菌種第一代恢復(fù)生長(zhǎng)時(shí)會(huì)有較長(zhǎng)的延遲期,培養(yǎng)此類菌種時(shí)需要將培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至正常培養(yǎng)時(shí)間的雙倍時(shí)長(zhǎng),甚至 2 周至更長(zhǎng)的時(shí)間。

注意:

如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況,請(qǐng)?jiān)谑盏骄N后2個(gè)月內(nèi)聯(lián)系,逾期不予受理!


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