>細胞CELL>biobw自建細胞系>人肺癌細胞
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵守無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化(注意把握消化時間,通??刂圃?~2min)。
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁運動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?,加6~8ml 完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落、吹散。
3. 取出部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液,待細胞密度達到70-80%時重復傳代操作或者凍存。