細胞詳述
骨髓間充質(zhì)干細胞是骨髓基質(zhì)干細胞，對骨髓中的造血干細胞（HSC）不僅有機械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進間充質(zhì)組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。
在骨髓中，BMSCs占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%~0.1%，含量極低。而同時，由于組織工程需要大量的種子細胞，從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實驗的開展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細胞的體內(nèi)、體外實驗顯得至關(guān)重要。
該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40+GFP基因。
細胞篩選
該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。 建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。
初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
細胞特性
1） 組織來源于實驗動物的正常骨髓血組織。
2） 細胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽性。
3） 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5） 細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2) T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用原代間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)體系作為體外培養(yǎng)原代骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)基。
名稱 體積 濃度 保存條件
原代間充質(zhì)干細胞細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 500ml 1× 4℃、避光
原代間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)添加劑 5ml 100× -20℃、避光
胎牛血清（FBS） 50ml 終濃度10% -20℃、避光
雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光
產(chǎn)品使用
1) 本產(chǎn)品僅能用于科研
2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核
3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核
操作流程
復蘇
1將恒溫水浴鍋中的水預熱到37℃；
2準備一支15ml離心管，加入5ml含10%FBS的完全培養(yǎng)基，放入37℃水浴鍋中預熱；
3戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入37℃恒溫水浴鍋中復溫晃動凍存管以提高復溫速率；
4將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm離心5min；
5準備一個T-25培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入4ml完全培養(yǎng)基；
6離心完成后棄去上清，用1ml完全培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入T-25細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
注意：從液氮中取出細胞凍存管時，若凍存管內(nèi)有液氮進入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，置于干冰上，然后放入37℃水浴中，避免溫差太大造成液氮快速氣化而爆炸。
傳代 （細胞傳代建議一傳二）
1 當細胞匯合度達到85%以上時，可進行傳代。
2 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；
3 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入3ml無菌的1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄PBS；
4 向瓶內(nèi)加入消化液1ml，浸潤底面后放入37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育1~2min；
5 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml含10%FBS的完全培養(yǎng)基中，將懸液吸入15ml離心管；
注：如還有部分細胞未消化下來，可采用分步消化：
① 準備一個無菌的15ml離心管，加入2ml含10%FBS的完全培養(yǎng)基；
② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打）；
③ 向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1ml胰酶繼續(xù)消化2min左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫落后加入2
