BFTC-905(人膀胱移行細(xì)胞癌)
產(chǎn)品類別:人源細(xì)胞系
培養(yǎng)體系:DMEM+15%FBS
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞單層貼壁生長(zhǎng),形成大胰島
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
同義詞:BFTC-905
背景:一位51歲的中國女性,1990年罹患膀胱三級(jí)乳頭狀移行細(xì)胞癌,病人住在臺(tái)灣黑腳病流行區(qū)
物種:人類(智人)
組織:膀胱
疾?。喊螂滓菩屑?xì)胞癌
形態(tài):上皮細(xì)胞單層貼壁生長(zhǎng),形成大胰島;
生長(zhǎng)方式:不適用
倍增時(shí)間:約60-70小時(shí)
DNA圖譜:無
科比奧爾的細(xì)胞系認(rèn)證服務(wù)
培養(yǎng)基:DMEM+15%FBS
我們強(qiáng)烈建議購買完整的培養(yǎng)基。
凍存介質(zhì):90%FBS+10%DMSO
支原體:DAPI、微生物培養(yǎng)、RNA雜交、PCR檢測(cè)呈陰性;用拜替利(恩諾沙星)和BM-細(xì)胞周期素(硫霉素和米諾環(huán)素)消除細(xì)菌污染
免疫學(xué):細(xì)胞角蛋白+,細(xì)胞角蛋白-7+,細(xì)胞角蛋白-8+,細(xì)胞角蛋白-17+,細(xì)胞角蛋白-18+,細(xì)胞角蛋白-19+,結(jié)蛋白-,內(nèi)皮細(xì)胞-,EpCAM+,GFAP-,神經(jīng)絲-,波形蛋白(+)
指紋圖譜:小衛(wèi)星標(biāo)記的多重PCR顯示了一個(gè)獨(dú)特的DNA圖譜
物種:經(jīng)AST,LDH等電聚焦電泳證實(shí)為人
細(xì)胞遺傳學(xué):人類扁平型超二倍體/亞三倍體核型-58(52-61)<3n>X/XX-X、-4、+5、-9、-13、-15、-16、-18、-21、-22、-22、+mar、add(1)(p36)、i(5p)、add(5)(q35)、del(9)(p22)、del(11)(p11)、add(11)(q13)、add(13)(p12)、add(13)(p12)、add(15)(p12)、add(19)(p13)-i(5p)和9p缺失與移行細(xì)胞癌相關(guān)已發(fā)表核型
病毒ELISA:逆轉(zhuǎn)錄酶陰性;PCR:EBV-、HBV-、HCV-、HHV-8-、HIV-1-、HIV-2-、HTLV-I/II-、MLV-、SMRV-
細(xì)胞收到后處理:
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察:未超過80%匯合度時(shí),可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上)