(CCC-SMC-2細胞)兔主動脈平滑肌細胞
細胞生長:貼壁生長
細胞形態(tài):多角
細胞數(shù)量:1×106個細胞數(shù)
細胞傳代:1:3傳代3~4天1次
細胞特性:利用2月齡大耳白兔胸腹主動脈去除內(nèi)皮剝離外膜進行原代培養(yǎng)經(jīng)aSMA鑒定純度連續(xù)培養(yǎng)可傳代16次以上
細胞純度:95%
細胞活力:87%(ViabilitybyTrypanBlueExclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
細胞凍存:液氮凍存(基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%DMSO+20%FBS)
細胞運輸:干冰運輸(1Vial)或活細胞運輸(T-25flasks)
細胞用途:只可用于科研不可用于臨床診斷和治療
(CCC-SMC-2細胞)兔主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)條件:
1、培養(yǎng)基:RPMI-1640培養(yǎng)基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗+800ng/ml Taxol
2、溫度:37.0°C
3、氣體:空氣 95%,CO2 5%
(CCC-SMC-2細胞)兔主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)方法:
收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:
如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細胞已長滿(達80-90%)。即可進行傳代,具體步驟如下:
a,棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2次。
b,向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液,輕輕吹打細胞。
c,加入等量的的培養(yǎng)液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)
d,傳代比例:1:2-1:3
溫馨提示:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是加入*高藥物濃度的,為800ng/ml。我們采取緩慢增加藥物的梯度的方法。具體步驟是,首先加含200ng/mlTaxol藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時間會有小部分細胞懸浮起來,屬于正常情況,通過換液可以去掉,等細胞待長滿就可以消化傳代了,這時可以一直用含藥物培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細胞,一兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml,兩代后可以將藥物濃度提高至*高水平800ng/ml,含藥物培養(yǎng)液用于細胞培養(yǎng)都沒有問題,凍存的時候就不要在凍存液里加藥物了。
(CCC-SMC-2細胞)兔主動脈平滑肌細胞保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。
(CCC-SMC-2細胞)兔主動脈平滑肌細胞復(fù)蘇的原則:
在實際操作中,凍存細胞要進行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。