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鑒定正確

 

通過STR鑒定

 

凍存條件

 

無血清凍存液

 

傳代方法

 

第一次建議1:2傳代 

 

傳代情況

 

2~3天換液/傳代

 

細胞描述

 

 這些細胞含有一個HTLV III（HIV，LAV）前病毒基因組缺陷。 除p64和p34蛋白外，所有主要結構蛋白均組成性表達。 無傳染性病毒產(chǎn)生；然而，與Leu-3+細胞共同培養(yǎng)可導致合胞體形成

 

備注

 

懸浮細胞請離心收集，并用無菌離心管收集瓶子中培養(yǎng)基，留作過渡對比培養(yǎng)。如果對比培養(yǎng)效果不好，建議直接購買我們的完全培養(yǎng)基。

 

細胞收到后處理

 

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

 

三、細胞培養(yǎng)步驟

 

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細胞傳代：

 

a、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

 

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

 

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

 

b、細胞凍存：

 

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

 

離心5min；

 

2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

 

3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

 

放 24 小時以上。

 

C、細胞復蘇：

 

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

 

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

 

3、棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

 

4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。