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92-1（est dab-127）是從一名76歲女性右眼眶的原發(fā)性葡萄膜黑色素瘤中建立的。92-1細(xì)胞系是在歐洲委員會第五框架基礎(chǔ)設(shè)施計劃（合同號QLRI-CT-2001-01325）的ESTDAB項(xiàng)目（歐洲可搜索腫瘤細(xì)胞系數(shù)據(jù)庫）期間收集的170多個特征性黑色素瘤細(xì)胞系之一。est dab（http://www.ebi.ac.uk/ipd/estdab）包含關(guān)于HLA分子的HLA基因型和表面表達(dá)、腫瘤抗原表達(dá)、抗原加工能力、細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生和反應(yīng)、凋亡調(diào)節(jié)和粘附/輔助分子表達(dá)的信息。這一信息附在下面。這些信息使研究人員能夠識別具有特定參數(shù)的細(xì)胞，這些參數(shù)對于免疫、免疫遺傳學(xué)、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)移、化療反應(yīng)和其他腫瘤生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究非常重要。

細(xì)胞特性

1）來源：人眼葡萄膜黑色素瘤

2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3）含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10X,20X）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                       

 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10% ；GlutaMAX-1谷氨酰胺1%   P/S  雙抗  1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。