細(xì)胞介紹
HEK-293T細(xì)胞是293T(293tsA1609neo)細(xì)胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原,該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)染效率較高。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時(shí)),即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作)。
細(xì)胞特性
1) 來(lái)源:人胚胎腎臟
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng),貼壁能力較弱
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)半貼細(xì)胞和貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:該細(xì)胞貼壁不是很牢,運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)有部分細(xì)胞飄起或者成團(tuán),屬于正?,F(xiàn)象,收到細(xì)胞后請(qǐng)先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定 2-4h 后再拍照留檔,密度大于 80%時(shí)再進(jìn)行處理,處理時(shí),離心上清,將上清中的細(xì)胞一同收集處理即可。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1) 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%; 雙抗 1%。
注意:
1. 該細(xì)胞貼壁不是很牢,運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)有部分細(xì)胞飄起或者成團(tuán),屬于正常現(xiàn)象,收到細(xì)胞后請(qǐng)先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定 2-4h 后再拍照留檔,密度大于 80%時(shí)再進(jìn)行處理,處理時(shí),離心上清,將上清中的細(xì)胞一同收集處理即可。
2. 培養(yǎng)時(shí)可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿。完全培養(yǎng)液中需添加熱滅活胎牛血清。細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密,過(guò)密細(xì)胞容易脫落,脫落下來(lái)的細(xì)胞可以通過(guò)離心收集,使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后繼續(xù)培養(yǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%FBS,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。