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C4-2是從人前列腺癌LNCaP細(xì)胞皮下去勢小鼠異種移植瘤中分離的具有上皮樣形態(tài)的細(xì)胞系。LNCaP細(xì)胞分離自前列腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。該細(xì)胞系的特性:向培養(yǎng)基分泌前列腺特異性抗原。應(yīng)用:前列腺癌致瘤性、雄激素非依賴性進(jìn)展和骨轉(zhuǎn)移人前列腺癌細(xì)胞系ln cap(1×106個(gè)細(xì)胞；段落# 29 ),如Horoszewiez，JS等在癌癥研究43:1809-1818，1983中所述；與來自骨肉瘤的(1×106)人成纖維細(xì)胞(細(xì)胞系MS)共接種到無胸腺雄性裸鼠中。在培養(yǎng)8周后，將裸鼠宿主閹割。總共12周后切除腫瘤樣本。C4細(xì)胞系構(gòu)成了從鼠宿主腫瘤生長的體外培養(yǎng)的亞系。當(dāng)C4亞系隨后與MS骨肉瘤成纖維細(xì)胞在閹割的無胸腺雄性裸鼠宿主中共接種另外12周時(shí)，通過上述相同的方案。從該宿主中產(chǎn)生的腫瘤培養(yǎng)的前列腺上皮細(xì)胞構(gòu)成了C4-2亞系。致瘤性和骨轉(zhuǎn)移:在完整和閹割的無胸腺雄性裸鼠中原位施用1×106個(gè)重懸的C4-2細(xì)胞產(chǎn)生100%的致瘤性在完整的和去勢的鼠宿主中都檢測到骨質(zhì)前列腺癌轉(zhuǎn)移。細(xì)胞又名LNCAP C4-2細(xì)胞。

 

細(xì)胞特性

 

1） 來源： 人前列腺癌LNCaP細(xì)胞

 

2） 形態(tài)：上皮樣細(xì)胞  貼壁細(xì)胞

 

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

 

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

5)  用途：僅供科研使用。

 

運(yùn)輸和保存

 

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

 

細(xì)胞接收后的處理

 

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

 

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

 

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

 

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

 

1）準(zhǔn)備DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%, ITS 1% P/S1%

 

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

二． 細(xì)胞處理

 

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

 

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

 

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法

 

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

 

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

 

輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

 

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。