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GT1-7是一種永生化的成熟小鼠下丘腦GnRH神經(jīng)元細(xì)胞系。通過將含有與SV40 T-抗原癌基因編碼區(qū)偶聯(lián)的GnRH基因啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)基因?qū)朕D(zhuǎn)基因小鼠，產(chǎn)生了永生化GnRH神經(jīng)元。從一只小鼠中取出所得的下丘腦前部腫瘤，分離并克隆細(xì)胞。GT1-7是成熟分化的Gnrh神經(jīng)元的克隆系，表現(xiàn)出高水平的Gnrh1 mRNA，并在去極化反應(yīng)中分泌GnRH。促性腺激素釋放激素(GnRH)是一種神經(jīng)肽，由下丘腦內(nèi)的GnRH神經(jīng)元合成和釋放，是正常生殖發(fā)育和功能所必需的。下丘腦嘴側(cè)部GnRH神經(jīng)元的稀少和分散分布使得對這些細(xì)胞的生物學(xué)研究變得困難。GT1-7細(xì)胞可用作下丘腦GnRH分泌神經(jīng)元的體外模型。

 

細(xì)胞特性

 

1） 來源：小鼠  下丘腦前部腫瘤

 

2） 形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長

 

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

 

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

5)  用途：僅供科研使用。

 

運輸和保存

 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

 

細(xì)胞接收后的處理

 

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

 

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

 

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

 

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

 

1） 準(zhǔn)備DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清8 %，HS(馬血清) 2%（兩種血清均需滅活，滅活方法： 42度，30分鐘），P/S 1%

 

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

二． 細(xì)胞處理

 

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

 

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

 

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

該細(xì)胞為輕微貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法

 

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

 

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

 

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

 

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。