人子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞；hEM15A
細(xì) 胞 完 全 培 養(yǎng) 基 配 制 ： DMEM/F12(1:1): Ham ＇ s F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50%
Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
凍存液配制：90%FBS，DMSO 10%
培養(yǎng)：氣象：空氣，95% CO2,5% 溫度37 ℃
收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有
污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
1）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片 一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
2） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去 上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
3）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完 全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
1. 將凍存管置于37℃水浴中來回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染， 確 保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速， 大約2分鐘。 2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用70% 酒精噴拭凍存 管表面。從此步開始，后續(xù)操 作須在生物安全柜中完成。
2. . 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用70% 酒精噴拭凍存 管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物 安全柜中完成。 3. 將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5 mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 心200×g /5 -10 min，用真空 泵去除含有凍存液的上清。
3. 將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5 mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 心200×g /5 -10 min，用真空泵去除含有凍存 液的上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證 細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù) 熱后使用
5. 將細(xì)胞置于含有5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
