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細(xì)胞名稱 PA317(小鼠成纖維細(xì)胞)
種屬 小鼠
年齡(性別) 胚胎
組織來源 胚胎
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
背景描述 PA317細(xì)胞源自TK-NIH/3T3細(xì)胞,通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞,結(jié)果生成可以感染許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。PA317細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟?,可能因?yàn)橛糜跇?gòu)建PA317細(xì)胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失,能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。在含0.03mM次黃嘌呤、0.001mM氨甲喋呤和0.02mM胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇,可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。選擇后,PA317細(xì)胞應(yīng)在HT培養(yǎng)基(0.03mM次黃嘌呤、0.02mM胸苷)中培養(yǎng)4天,以稀釋殘留的氨甲喋呤,此后PA317細(xì)胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個(gè)月。
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM高糖+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃