細(xì)胞名稱：CTLL-2，小鼠T淋巴細(xì)胞
規(guī)格：T25瓶或者2ml凍存管
生長特性：懸浮生長傳代比例：持細(xì)胞濃度在1×105~2×106/ml
培養(yǎng)條件：90%RPMI-1640，10%胎牛血清(優(yōu)質(zhì))，100U/ml rmIL-2，100U/ml雙抗，37℃,5%CO2
凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO
僅供科研使用，不可用于臨床診斷和治療
凍存細(xì)胞接收后的處理：
1）干冰運(yùn)輸，收到細(xì)胞后推薦直接復(fù)蘇1管，另一管放入-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮，細(xì)胞直接轉(zhuǎn)入液氮暫存可能導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇率降低。
2）收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)完全揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請(qǐng)立即拍照后與我們聯(lián)系。
復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請(qǐng)立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片2~3組以及培養(yǎng)瓶外觀照留存。
3）75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，鏡檢觀察細(xì)胞密度未達(dá)到80-90%時(shí)，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，離心后棄去上清，用新鮮完全培養(yǎng)基重懸后加入T25培養(yǎng)瓶或60mm皿中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基。
4）如您收到細(xì)胞7天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
注：發(fā)貨用培養(yǎng)基不可再次用來培養(yǎng)細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm離心5min，小心棄去上清；
②加1-2ml新鮮完全培養(yǎng)基吹勻重懸后按照1:2比例加入2個(gè)T25培養(yǎng)瓶或60mm皿中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
注：第一次傳代推薦1:2傳代，后續(xù)可根據(jù)細(xì)胞生長以及客戶需求自行確定。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml新鮮完全培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶或者60mm培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存
①收集所有細(xì)胞懸液，可細(xì)胞計(jì)數(shù)，1000rpm離心5min，棄上清；
②加入配制好的凍存培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，凍存液的添加量按細(xì)胞最終濃度為1~10×106/ml添加。
③將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
