啟動子 | T7/lac |
復制子 | ColE1 ori,F(xiàn)1 ori |
終止子 | T7 terminator |
質粒分類 | 大腸桿菌載體;PET系列表達質粒 |
質粒大小 | 5933bp |
質粒標簽 | N-GST, N-6×His, N-Thrombin |
原核抗性 | 卡那霉素Kan |
克隆菌株 | DH5α |
培養(yǎng)條件 | 37℃,有氧,LB |
表達宿主 | BL21(DE3) |
誘導方式 | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測序引物 | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測序引物 | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
質粒簡介 | pET41系列載體是設計用來克隆和高水平表達蛋白質的載體,載體融合表達一個含有220個氨基酸的GST標簽蛋白純化片段。pET41a載體的單一的多克隆位點見上面的環(huán)狀質粒圖譜。注意:載體序列是以pBR322質粒的編碼規(guī)矩進行編碼的,所以T7蛋白表達區(qū)在質粒圖譜上面是反向的。 T7 RNA聚合酶啟動的克隆和表達區(qū)域在質粒圖譜中也被標注了出來。質粒的F1復制子是被定向的,所以在T7噬菌體聚合酶的作用下,包含有蛋白編碼序列的病毒 粒子能夠產生,并啟動蛋白表達,同時蛋白表達將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。pET-41a載體上面含有一個EK蛋白酶切位點,當將目的基因使用載體上面的PshAI限制性內切酶位點插入進去時,可以通過EK蛋白酶將載體上的融合的所有氨基酸序列包括GST標簽序列, |