>
中國微生物菌種>
國內(nèi)微生物菌種資源>
stabl3感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明 | 大腸桿菌Stabl3是由大腸桿菌HB101衍生出來的菌種。該菌種適合于不穩(wěn)定的片段的克隆,比如包含正向重復(fù)的慢病毒。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×108cfu/μg以上。 |
基因型 | F–mcrB mrr hsdS20(rB–, mB–) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ– leu mtl-1。 |
產(chǎn)品特點(diǎn) | 1.適合于慢病毒以及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的復(fù)制。 2.有效降低錯(cuò)誤重組。 |
操作步驟 | 1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,放置10分鐘。 2.向感受態(tài)細(xì)胞中加入1-5μl含有1pg-100ng的質(zhì)粒DNA,輕輕地敲打4-5下。 3.冰浴30分鐘,不要震蕩。 4.42℃熱擊30秒,不要震蕩,迅速轉(zhuǎn)移到冰浴中,放置2分鐘。 5.加入250μl室溫的SOC培養(yǎng)基。 6.混勻后,置于37℃的搖床上,250rpm震蕩培養(yǎng)60min。 7.將含有抗生素的平板加熱到37℃,放置半個(gè)小時(shí),使其表面干燥,易于均勻涂布。 8.根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,取適量轉(zhuǎn)化的感受態(tài)的細(xì)胞,加到含有抗生素的固體瓊脂糖培養(yǎng)基上(LB或SOC),用無菌棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃培養(yǎng)箱,倒置過夜培養(yǎng)(8-12h)。 |
運(yùn)輸和儲(chǔ)藏 | 干冰運(yùn)輸,收到后請置于-80℃。 |
注意事項(xiàng) | 1.剛剛?cè)诨募?xì)胞,轉(zhuǎn)化效率最高 2.避免反復(fù)凍融 3.避免用移液槍吸吹 4.整個(gè)操作過程要輕柔 |