| 質(zhì)粒簡(jiǎn)介 |
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)組成緊湊，幾乎不含多余的 DNA片段，GenBank注冊(cè)號(hào)為 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而來(lái)，其中 lacZ (MSC)來(lái)自 M13mp18/19 。這兩個(gè)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是完全一樣的，只是多克隆位點(diǎn)的排列方向相反。這些質(zhì)粒缺乏控制拷貝數(shù)的 rop 基因，因此其拷貝數(shù)達(dá) 500-700 。 pUC 系列載體含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分編碼序列，在特定的受體細(xì)胞中可表現(xiàn) α-互補(bǔ)作用。因此在多克隆位點(diǎn)中插入了外源片段后，可通過(guò) α-互補(bǔ)作用形成的藍(lán)色和白色菌落篩選重組 質(zhì)粒。pUC18、pUC19載體適合于DNA片段的克隆、進(jìn)行DNA測(cè)序、對(duì)外源基因進(jìn)行表達(dá)等。由于在lacZ領(lǐng)域中含有多克隆位點(diǎn)，因此在以lacZ缺欠細(xì)胞作為宿主 (如：JM109等) 進(jìn)行轉(zhuǎn)化后，在含有IPTG、X-Gal 的平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，可以很容易地通過(guò)藍(lán)白篩選，判斷載體中有無(wú)DNA片段的插入。同時(shí)還可以通過(guò)載體上的lac promoter表達(dá)外源基因，對(duì)插入載體中的DNA片段進(jìn)行測(cè)序等。進(jìn)行DNA測(cè)序時(shí)，可以方便地使用M13系列的通用引物。 |
