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海岸分枝桿菌的形態(tài)特征與培養(yǎng)方法及實驗內(nèi)容!
小楊 / 2024-03-29 09:26:07

 

海岸分枝桿菌是Mycobacterium屬的微生物,原產(chǎn)地為中國。主要用途為分類學(xué)研究,具體用途為模式菌株。
 
一、菌種簡介
平臺編號:Bio-03107 
提供形式:凍干物
拉丁屬名:Mycobacterium Litorale 
中文譯名:海岸分枝桿菌
拉丁學(xué)名:Mycobacterium litorale
原始編號:F4
菌株來源:←北京理工大學(xué)生命學(xué)院
保藏人:張建麗
直接來源國家:中國
保藏時間:3/10/2010
其他保藏編號:=JCM 17423
生物危害:四類
模式菌株:模式菌株
菌株用途:模式菌株
培養(yǎng)溫度:28℃
培養(yǎng)基:0234    
其他培養(yǎng)條件
分離源:海岸海沙
采集地點:海南省??谑?/div>
采集國家:中國
用途:模式菌株 
注意事項:僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準)
 
二、形態(tài)特征
革蘭氏陽性,桿狀,有時有分枝,可呈絲狀體??顾?。無內(nèi)生孢子或分生孢子。含分枝菌酸。主要的醌為MK-9(H2)。多為致病菌。
 
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
 
四、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
 
五、保存方法
1、傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法:
(1)蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
(2)糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法:土壤保存法;砂土保存法;硅膠保存法;磁珠保存法;麩皮保存法;紙片(濾紙)保存法。
 
六、注意事項
1)凍干首次活化,干粉要全部用完,不能預(yù)留,用無菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培養(yǎng)液(即以上建議的培養(yǎng)基配方,不加瓊脂)或者無菌水,滴入凍干管中,輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液,接種在培養(yǎng)基上(建議不超過 2 支平板,操作完畢后盡快置于厭氧環(huán)境下恒溫培養(yǎng);若需接種液體培養(yǎng)基,制作培養(yǎng)液時,應(yīng)使用厭氧螺口試管,并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)液中的氧氣);
2)經(jīng)過冷凍干燥保藏,菌種處于休眠狀態(tài),復(fù)蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長,這時需較長的培養(yǎng)時間; 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物(非凍干菌),則可以直接用于您的實驗,或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處,請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員,避免不必要的損失;
3)微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方,室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退;
4)菌種操作應(yīng)在無菌條件下進行;轉(zhuǎn)種完畢,應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理;
5)應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接,凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年;
6)菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降,應(yīng)及時和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系。
7)如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況,請在收到后 2 個月內(nèi)聯(lián)系,逾期不予受理;
8)打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護設(shè)備中進行,生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作,打管時凍干管應(yīng)遠離面部,保護眼睛。
9)安瓿瓶開封:用浸過 75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量(2-3滴)無菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍,并保持在火焰旁操作。
 
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