膠孢炭疽菌的特點與優(yōu)勢及微生物培養(yǎng)方法！
小楊 / 2024-04-15 09:07:28
膠孢炭疽菌為炭疽菌屬的一種。引起植株炭疽病。病害癥狀主要為害葉片。多從葉尖、葉緣發(fā)病，或于葉片表面著生近圓形的病斑。病斑圓形或不規(guī)則形，邊緣黑褐色，內(nèi)部凹陷，灰褐色或灰黑色；后期著生小黑點，病健交界明顯。
一、菌種簡介
提供形式：斜面培養(yǎng)物
英文名稱：Colletotrichum gloeosporioides Penz.
屬名：Colletotrichum
種名加詞：gloeosporioides Penz.
來源歷史：←中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所←中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所
收藏時間：2007-12-31
原始編號：CATAS EPPI2061, Z20070061
原產(chǎn)國：中國 CN
資源歸類編碼：15151911101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：a:4:{i:0;s:4:分類;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教學(xué);i:3;s:4:生產(chǎn);}
特征特性：菌絲初期無色，后期變?yōu)闇\褐色。圓筒形，有隔膜和分枝，直徑2～7um。在培養(yǎng)基中產(chǎn)生黑色素。分生孢子盤多在葉面散生或不規(guī)則排列，淺褐色，圓形或卵圓形，扁平或隆起，直徑100～250um。分生孢子盤內(nèi)密生短小的分生孢子梗，梗上有分生孢子。孢盤上有時長有硬而長、直或彎的深褐色剛毛。剛毛有1～2個隔膜，大小為500～1000um×4～7um；有時缺少這種剛毛。分生孢子單胞，無色，橢圓形或圓筒形，有油點或無；孢子大小因培養(yǎng)基種類或寄生部位不同而有差異，一般大小為12.2～15.8um×4.0～5.4um。葉片受害后，多在葉尖或葉緣出現(xiàn)，初為水漬狀褐色的小斑，后向下，向內(nèi)擴(kuò)展成橢圓形或梭形至不規(guī)則形褐斑，斑面有明顯或不明顯的云紋。數(shù)個病斑連合成斑塊，葉片變褐干枯。潮濕時斑面出現(xiàn)小黑點，即病菌分生孢子盤。
具體用途：教學(xué)科研，分類
生物危害程度：四類
致病對象：植物
致病名稱：閉鞘姜炭疽病
傳播途徑：以菌絲體和分孢盤在病部或隨病殘體遺落在土中越冬。以分生孢子作為初侵與再侵接種體，借助雨水濺射等傳播，從傷口或孔口侵入致病。在南方特別是在廣東，病菌可在田間多種寄主作物間輾轉(zhuǎn)傳播危害，并無明顯越冬期。
分離基物：閉鞘姜葉片
采集地：海南省儋州市
培養(yǎng)基編號1：0014
培養(yǎng)溫度：N19.30′
資源保藏類型：a:1:{i:0;s:6:培養(yǎng)物;}
保存方法：a:3:{i:0;s:15:-80℃冰箱凍結(jié)法;i:1;s:8:礦物油法;i:2;s:4:其他;}
共享方式：a:1:{i:0;s:10:公益性共享;}
用途：教學(xué)科研，分類
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、產(chǎn)品特點
1、菌種功能明確、品種穩(wěn)定、應(yīng)用；
2、產(chǎn)品僅限用于科研本品芽孢含量高,穩(wěn)定性好、耐高溫和擠壓；
3、繁殖能力快、定植能力強(qiáng)、易存活、耐受低pH值環(huán)境；
4、復(fù)活迅速,可在短期內(nèi)成為優(yōu)勢種群；
5、本品安全高效、無抗藥性、不污染環(huán)境；
6、對多數(shù)抗生素不敏感,可與低濃度抗革蘭氏陰性菌抗生素同時使用。
三、產(chǎn)品優(yōu)勢
1、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,是為科研和生產(chǎn)提供微生物菌種資源共享服務(wù)的專業(yè)平臺。
2、國內(nèi)首創(chuàng)封閉管包裝,凍干后的菌株使用時添加配套的復(fù)蘇培養(yǎng)基后迅速而完全溶解。針對不同的菌株提供八種不同的培養(yǎng)方法,保證菌種的復(fù)蘇質(zhì)量。
3、嚴(yán)格的質(zhì)檢程序,確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
4、該類產(chǎn)品廣泛使用到食品、藥品、化妝品、水產(chǎn)品、化工等行業(yè),疾控中心、質(zhì)檢局、出入境、藥檢局等等,得到廣泛好評。
四、微生物菌種的培養(yǎng)
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
五、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
六、保藏方法
1、傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細(xì)菌用),培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,能夠適當(dāng)延長保藏時間,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,另一方面可阻止氧氣進(jìn)入,以減弱代謝作用。
3、載體保藏法
是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體,如土壤、沙子、硅膠、濾紙上,而后進(jìn)行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物,如病毒、立克次氏體、螺旋體等,它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。
5、冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6、冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥)。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來制備細(xì)胞懸液,以防止因冷凍或水分不斷升華對細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過氫和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。
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