蘆筍狀腸道梭狀菌的培養(yǎng)方法與實驗內(nèi)容及操作步驟！
小楊 / 2024-04-15 09:37:14
一、菌種簡介
規(guī)格：平板
拉丁屬名：Enterocloster Asparagiformis
培養(yǎng)基：哥倫比亞平板 特殊蛋白胨：23.0，可溶性淀粉：1.0，氯化鈉：5.0，瓊脂：10.0，pH：7.3±0.2（25℃）
生長條件：37℃；48-72h；厭氧
存儲條件：2-8℃
安全等級：1
形態(tài)：菌落直徑為0.5-1mm，圓形，邊緣不規(guī)則，不透明，正面灰白色，中間凸起，表面光滑，表面明亮，質(zhì)地濕潤，易挑起，G－（紅），桿菌。
分離基物：human faeces
模式菌株：yes
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、操作步驟
①準備上述平板 1-2 塊；
②平板表面消毒后在安全柜中打開；
③吸取 1-3ml 無菌水（置于厭氧環(huán)境平衡24h）打入平板中，用無菌涂布棒在平板表層來回刮取菌苔，制成菌懸液；
④用巴氏吸管吸取菌懸液，打入到新鮮的平板上，涂布均勻；
⑤將平板置于上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)即可。
五、注意事項
1）凍干粉首次活化，干粉要全部用完，不能預留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支平板或者斜面）；
2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；
4）菌種操作應在無菌條件下進行；轉(zhuǎn)種完畢，應經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
7）如若有菌種復蘇不活或者污染等情況，請在收到菌鐘后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專業(yè)微生物技術人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。
9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細菌的活力會逐漸下降。
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