魯考弗美奇酵母的菌株培養(yǎng)與操作步驟及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2024-05-10 09:17:53
魯考弗美奇酵母是Metschnikowia屬的微生物，原產(chǎn)地為中國(guó)。菌落大而厚，易挑起，為乳白色圓形菌落，表面光滑，邊緣整齊，中央微有隆起。生殖方式為出芽生殖，細(xì)胞呈棒狀。最適生長(zhǎng)溫度在20～30℃。主要用途為分類；研究；教學(xué)。
一、菌種簡(jiǎn)介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Metschnikowia Reukaufii
拉丁名稱：Metschnikowia reukaufii
其它保藏中心編號(hào)：=AS 2.1754
來(lái)源歷史：←湖南輕工研究院(5.200) ←中科院微生物研究所
收藏時(shí)間：2007/2/16
原始編號(hào)：3047
資源歸類編碼：15151113118
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
特征特性：不發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、山梨糖、麥芽糖、乳糖、纖維二糖、木糖、半乳糖、可溶性淀粉；同化乙醇；不同化木糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、麥芽糖、乳糖、纖維二糖、山梨糖、可溶性淀粉。
生物危害程度：四類
培養(yǎng)基編號(hào)：CM0077
培養(yǎng)基名稱：5 °Bé麥芽汁瓊脂
培養(yǎng)基成分：5°Bé麥芽汁 1.0L，瓊脂 15.0g，自然pH。
培養(yǎng)溫度：28-30℃
需氧類型：好氧
保存方法：真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
提供形式：凍干物
用途：研究；
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)ph→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。
2、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
3、載體保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅膠保存法；磁珠保存法；麩皮保存法；紙片(濾紙)保存法。
4、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
五、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無(wú)菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請(qǐng)勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和
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