自養(yǎng)假諾卡氏菌的特征特性與資源描述及培養(yǎng)方法！
小楊 / 2024-05-11 09:41:56
自養(yǎng)假諾卡氏菌用于實(shí)驗(yàn)和科研檢測(cè)用，屬于菌株類(lèi)。該菌能夠利用二氧化碳或碳酸氫鈉為唯一碳源。也可異養(yǎng)生長(zhǎng)。
一、菌種簡(jiǎn)介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Pseudonocardia Autotrophica
拉丁學(xué)名：Pseudonocardia autotrophica
菌株來(lái)源：←中國(guó)科學(xué)院微生物研究所←美國(guó)IMRU
保藏人：劉志恒
直接來(lái)源國(guó)家：美國(guó)
保藏時(shí)間：11/1/1991
其他保藏編號(hào)：=ATCC 19727 =BCRC 12444 =CBS 466.68 =CIP 107114 =DSM 40011 =ISP 5011 =JCM 4348 =KCTC 1816 =NBRC 127
生物危害：四類(lèi)
模式菌株：模式菌株
菌株用途：模式菌株
培養(yǎng)溫度：28℃
培養(yǎng)基：0240
用途：模式菌株
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、資源描述
該菌孢子絲直或柔曲。分生孢子為柱形或卵圓形，表面光滑。明膠不液化。淀粉不水解。硝酸鹽不還原。纖維素上不生長(zhǎng)。不產(chǎn)生類(lèi)黑色素和酪氨酸酶，不產(chǎn)生硫化氫。該菌能夠利用二氧化碳或碳酸氫鈉為唯一碳源。也可異養(yǎng)生長(zhǎng)。
三、特征特性
菌落致密，圓形，黑毛發(fā)狀。分生孢子梗2～3根簇生，直或彎曲，上部1～2次分枝，暗棕色，向頂逐步變淡，基部膨大，厚壁，多個(gè)隔膜。產(chǎn)孢細(xì)胞圓柱形,瓶體產(chǎn)孢,瓶口平截，合生和頂生,棕色。分生孢子單生，頂側(cè)生，棕色，倒棍棒形，基部平截，厚壁，5～6個(gè)橫隔膜。
四、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱(chēng)種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
五、使用范圍
（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分精確，重復(fù)性強(qiáng)，而且微生物在這類(lèi)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢。如高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。
（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類(lèi)培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營(yíng)養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，所以常被采用。
（3）半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分，如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類(lèi)培養(yǎng)基能更有效地滿(mǎn)足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要。
六、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。
2、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
3、載體保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅膠保存法；磁珠保存法；麩皮保存法；紙片(濾紙)保存法。
4、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
七、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無(wú)菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請(qǐng)勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢(xún)我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
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