嗜熱脂肪地芽胞桿菌：用于秸稈腐熟和產(chǎn)高溫菌
小楊 / 2024-05-16 09:28:19
嗜熱脂肪地芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus）屬嗜熱性需氧芽孢桿菌，但兼有厭氧的特性，細(xì)菌繁殖體G蘭氏染色陽性呈紫色，細(xì)菌芽胞孔雀綠著色。嗜熱脂肪地芽孢桿菌比較容易識別且對人體沒有危害性，一般作為空間消毒的指示生物。
一、菌種簡介
提供形式：凍干物
英文名稱：Geobacillus thermophilus
屬名：Geobacillus
種名加詞：thermophilus
其它保藏中心編號：=DSM22＝
ATCC 12980＝CCM 2062＝CCUG 26241＝IAM 11062＝IFO 12550＝NCIB 8923＝NCTC 10339＝VKM B-2231
來源歷史：← DSMZ ← ATCC ←NCA, 26
資源歸類編碼：15131311103
模式菌株：模式菌株
主要用途：a:3:{i:0;s:4:分類;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教學(xué);}
具體用途：秸稈腐熟，高溫菌
生物危害程度：四類
致病對象：無
培養(yǎng)基編號1：0266
資源保藏類型：a:1:{i:0;s:6:培養(yǎng)物;}
保存方法：a:3:{i:0;s:14:真空冷凍干燥法;i:1;s:8:礦物油法;i:2;s:10:定期移植法;}
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用途：秸稈腐熟，高溫菌
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)ph→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。
2、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
3、載體保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅膠保存法；磁珠保存法；麩皮保存法；紙片(濾紙)保存法。
4、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
五、注意事項
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和
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