小鼠腎小管平滑肌細胞的使用方法與注意事項！
小楊 / 2024-05-23 09:33:01
一、細胞簡介
小鼠腎小管平滑肌細胞分離自腎組織；腎小管是與腎小囊壁層相連的細長上皮性小管，具有重吸收和排泌功能，在排泄代謝產(chǎn)物、維持機體體液平衡及酸堿平衡方面起關(guān)鍵作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能，主要分為近曲小管、髓袢和遠曲小管三部分。
小鼠腎小管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。
二、產(chǎn)品信息
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：原代細胞
培養(yǎng)條件：原代細胞取組織現(xiàn)分
培養(yǎng)基：MCM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，F(xiàn)BS，Penicillin，Streptomycin等；
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形
傳代特性：可3-5代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
用途：研究
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
三、使用方法
小鼠腎小管平滑肌細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形，在澳睿賽技術(shù)部標(biāo)準操作流程下，可傳3-5代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1、取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2、貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3、細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補加1%FBS，促進貼壁)重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
4、細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
四、注意事項
1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2、收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3、由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5、客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話：010-53515223，我們隨時給予解答。
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