類球布勞特氏菌的傳代與培養(yǎng)及使用與注意事項(xiàng)！
小楊 / 2024-06-04 09:45:37
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Blautia Coccoides
拉丁名：Blautia coccoides
培養(yǎng)基：哥倫比亞血平板（英文名：CA-B）：酪蛋白胰酶消化物 10.0g，心胰酶消化物 3.0g，玉米淀粉 1.0g，肉胃酶消化物 5.0g，酵母浸出粉 5.0g，氯化鈉 5.0，瓊脂 20.0g，蒸餾水 1.0L，pH 7.3±0.2。121℃，15min滅菌后，冷卻至55℃，后添加5%無菌脫纖維羊血，搖勻倒板冷卻備用。
生長條件：37℃；3-5天；厭氧
存儲條件：2-8℃
安全等級：1
形態(tài)：菌落直徑為1-2mm，圓形，邊緣不整齊，不透明，正面白色，中間凸起，表面光滑，表面明亮，質(zhì)地濕潤，易挑起，G＋（藍(lán)紫色），球菌。
分離基物：mouse faeces
模式菌株：yes
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、傳代方法
1、準(zhǔn)備上述新鮮平板 1-2 塊；
2、帶菌平板表面消毒后在安全柜中打開；
3、吸取 1-3ml 無菌水（提前置于厭氧環(huán)境除氧24h）打入平板中，用無菌涂布棒在平板表層來回刮取菌苔，制成菌懸液；
4、用巴士吸管吸取菌懸液，打入到新鮮的平板上，涂布均勻；
5、將平板置于上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。
三、培養(yǎng)方法
1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、使用范圍
（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分精確，重復(fù)性強(qiáng)，而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。
（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，所以常被采用。
（3）半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無機(jī)鹽類，或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分，如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。
六、保藏條件
斜面菌種和安瓿瓶凍干菌種應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請置于-20°C 保存。甘油管請置于-80°C 保存;請勿長期置于室溫。
七、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支斜面或平板；或直接接種液體培養(yǎng)基，以不超過 5ml 為宜）；
2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；如有不明白之處，請務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；二次接種量要多，固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長得比較明顯，液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng)；
3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導(dǎo)致菌種衰退；
4）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時和
微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系；
7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請?jiān)谑盏骄姾?2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛；
9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作；
10）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會逐漸下降。
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