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紫紅鏈霉菌的培養(yǎng)方法與實驗內(nèi)容及使用范圍!
小楊 / 2024-06-19 09:41:47

 

紫紅鏈霉菌,孢子絲3—8圈螺旋形,孢子呈球形、卵圓形,表面光滑。氣絲薄,粉狀,白色變?yōu)闋a灰?guī)⑺{(lán)色彩。主要用于產(chǎn)生次甲霉素和原放線紫紅素。
 
一、菌種簡介
平臺編號:Bio-00347 
提供形式:凍干物
拉丁屬名:Streptomyces Violaceoruber 
中文譯名:紫紅鏈霉菌
拉丁學(xué)名:Streptomyces violaceoruber
原始編號:LMG 20256
菌株來源:←中國科學(xué)院微生物研究所←LMG
保藏人:劉志恒
直接來源國家:比利時
保藏時間:5/1/2002
其他保藏編號:=ATCC 14980 =BCRC 11489 =CBS 569.68 =DSM 40049 =ISP 5049 =JCM 4423 =NBRC 12826 =NRRL B-12594
生物危害:四類
模式菌株:模式菌株
菌株用途:模式菌株;Produces methylenomycin and protoactinorhodin
培養(yǎng)溫度:28℃
培養(yǎng)基:0038    
用途:模式菌株;產(chǎn)生次甲霉素和原放線紫紅素 
注意事項:僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))
 
二、菌株特性
蔗糖硝酸鹽瓊脂:氣絲薄,粉狀,白色變?yōu)闋a灰?guī)⑺{(lán)色彩?;z好,無色變紅色,然后藍(lán)色至暗藍(lán)色。可溶色素藍(lán)色至暗藍(lán)色。色素隨pH變化,遇酸變紅色,遇堿變藍(lán)色。葡糖天冬素瓊脂:基絲貧乏,紅色素不易彌散。甘油天冬素瓊脂:基絲好,紫色至深藍(lán)色??扇苌厣钏{(lán)色。甘油天冬素瓊脂(ISP)、無機(jī)鹽淀粉瓊脂(ISP)、酵母精麥芽精瓊脂(ISP)、燕麥粉瓊脂(ISP):氣絲灰色?;z反面藍(lán)色或紫色:加0.05 NNaOH,由紫色或藍(lán)紫色變藍(lán)色;加 0.05 NHCl,由紫色變紅紫色或紅色??扇苌厮{(lán)色或紫色,對酸堿反應(yīng)與基絲色同。營養(yǎng)瓊脂:基絲白色變?yōu)榧t色帶白色邊緣。無可溶褐色素。馬鈴薯塊:氣絲白色?;z地衣狀,微褐色,逐漸染為紅色和藍(lán)色。明膠液化緩慢。牛奶凝固有限,胨化快。淀粉水解快。纖維素上生長好。硝酸鹽還原強(qiáng)。不產(chǎn)生類黑色素。利用 L-阿拉伯糖、L-木糖、D-果糖、L-鼠李鼠、棉子糖、甘露醇;大部分菌株不利用或很少利用蔗糖、菊糖。ISP:利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、L-鼠李糖、肌醇
 
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
 
四、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查 
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物 
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查 
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
 
五、使用范圍
(1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚,組成成分精確,重復(fù)性強(qiáng),而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等。 
(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營養(yǎng)豐富,培養(yǎng)效果好,所以常被采用。 
(3)半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無機(jī)鹽類,或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。
 
六、保存方法
1、傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
3、懸液保存法:
①蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4、載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法:
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃):是適用范圍最廣的微生物保存法。
 
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