甲型副傷寒沙門氏菌的形態(tài)特征與菌株培養(yǎng)及操作方法！
小楊 / 2024-06-21 09:55:53
甲型副傷寒沙門氏菌是Salmonella屬的微生物，原產(chǎn)地為中國(guó)。主要用途為分類；研究；教學(xué)，具體用途為分類學(xué)研究。
一、菌種簡(jiǎn)介
規(guī)格：凍干粉
拉丁屬名：Salmonella Paratyphi-A
屬：Salmonella
原產(chǎn)地：中國(guó)
模式菌株：非模式菌株
保存條件：2-8℃,避光
批號(hào)：50001-25
用途：教學(xué)
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、形態(tài)特征
甲型副傷寒沙門氏菌，革蘭氏染色負(fù)反應(yīng)無(wú)芽孢桿菌，無(wú)莢膜，有鞭毛， 有動(dòng)力菌株，菌落呈中等大小，光滑、濕潤(rùn)、隆起，產(chǎn)硫化氫，對(duì)氯霉素、土霉素、鏈霉素和磺胺類藥物敏感?？砂l(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇分解賴氨酸，不發(fā)酵乳糖、蔗糖，不分解尿素，可以檸檬酸鹽作為唯一碳源。
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、操作步驟
①將凍存管進(jìn)行水浴（霉菌30℃，細(xì)菌37℃）溶解，快速振搖溶解；
②使用酒精棉擦拭凍存管外壁消毒，隨后轉(zhuǎn)移至安全柜操作；
③旋開管蓋，將溶解液全部吸出，打入1-2個(gè)瓊脂平板（每塊平板約200μL，培養(yǎng)厭氧菌需將培養(yǎng)基提前置于厭氧環(huán)境中除氧24h）；
④涂布均勻后轉(zhuǎn)移至上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。
六、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無(wú)菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請(qǐng)勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
5）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和
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