ATCC 27340延長布勞特氏菌的培養(yǎng)方法與操作步驟！
小楊 / 2024-07-12 08:40:39
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Blautia Producta
培養(yǎng)基：特殊蛋白胨：23.0，可溶性淀粉：1.0，氯化鈉：5.0，瓊脂：10.0，pH：7.3±0.2（25℃）
生長條件：37℃；48-72h；厭氧（或改良PYG）
存儲條件：-80℃
安全等級：1
菌株形態(tài)：菌落直徑為1-2mm，圓形，邊緣整齊，不透明，正面灰白色，中間凸起，表面光滑，表面明亮，質(zhì)地濕潤，易挑起，G＋（藍紫色），球菌。
分離基物：人敗血癥
模式菌株：yes
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一種）、原種（二種）和栽培種（三種）三。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備，其中(1)～(4)為孢子制備過程。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐(6)的種子。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶(5)液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、操作步驟
①將凍存管進行37℃水浴溶解，快速振搖溶解；
②使用酒精棉擦拭凍存管外壁消毒，隨后轉(zhuǎn)移至安全柜操作；
③旋開管蓋，將溶解液全部吸出，打入1-2個瓊脂平板（每塊平板約200μL，培養(yǎng)厭氧菌需將培養(yǎng)基提前置于厭氧環(huán)境中除氧24h）；
④涂布均勻后轉(zhuǎn)移至上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。
四、注意事項
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、菌種恢復培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，如在說明建議的培養(yǎng)時間還未長起來，請繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時或者更長時間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實驗。
3、初次使用時請嚴格按照本說明書推薦條件和操作步驟進行復活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負責任。
4、恢復培養(yǎng)厭氧菌時，在操作過程中應(yīng)嚴格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
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