易變鏈霉菌的明膠作用及培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容！
小楊 / 2024-08-05 09:15:34
易變鏈霉菌，屬放線菌，孢子橢圓形、長圓形、表面光滑。對革蘭氏陽性細(xì)菌、酵母、絲狀真菌抑制作用弱。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干粉
拉丁屬名：Streptomyces Mutabilis
拉丁學(xué)名：Streptomyces mutabilis
原始編號：174017
菌株來源：←河北大學(xué)
保藏人：張利平
直接來源國家：中國
保藏時(shí)間：9/3/2008
生物危害：四類
模式菌株：非模式菌株
菌株用途：研究
培養(yǎng)溫度：28℃
培養(yǎng)基：0012
分離源：灌木下土壤
采集地點(diǎn)：湖北省武漢磨山
采集國家：中國
提供形式：凍干物
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、菌株性質(zhì)
高氏合成1號瓊脂：氣絲灰色或暗灰色，粉狀或絨狀?；z微綠色或綠褐色，日久變?yōu)楹肿仙??？扇苌爻跷⒕G色 、后污紫色。甘油天冬素瓊脂(ISP)、無機(jī)鹽淀粉瓊脂 (ISP)、酵母精麥芽精瓊脂(ISP)、燕麥粉瓊脂(ISP)：氣絲灰色或白色。基絲反面無鑒別色素，色素非pH指示劑?？扇苌?zé)o，只在第三種培養(yǎng)基內(nèi)有跡量黃色或綠黃色，對pH不敏感。高氏有機(jī)2號瓊脂：氣絲少，淺灰色或黃灰色?；z黃褐色?？扇苌鼐G褐色。馬鈴薯塊：氣絲暗灰色?；z好，黃綠色或綠褐色。可溶色素綠褐色。
三、明膠作用
明膠液化7天弱，20—25天完全，綠褐色素。牛奶凝固并緩慢胨化，微粉色素。淀粉水解弱或無。纖維素上生長。 硝酸鹽不還原。不產(chǎn)生類黑色素、酪氨酸酶和H2S。利用 D-葡萄糖、L-阿拉伯糖D-木糖、D-果糖、鼠李糖、肌醇、D-甘露醇；在蔗糖上略有生長；不利用棉子糖。對革蘭氏陽性細(xì)菌、酵母、絲狀真菌抑制作用弱。
四、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
六、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
3、懸液保存法：
（1）蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
（2）糖液保存法：適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4、載體保存法：土壤保存法;砂土保存法;硅膠保存法;磁珠保存法;麩皮保存法;紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍最廣的微生物保存法。
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