人卵巢癌細(xì)胞紫杉醇耐藥株的復(fù)蘇與傳代及凍存操作說明！
小楊 / 2024-08-16 08:52:40
細(xì)胞簡介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：A2780/ Taxol
細(xì)胞別稱：A2780/ Taxol ；人卵巢癌細(xì)胞紫杉醇耐藥株
種屬來源：人
組織來源：卵巢
生長特性：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)：10代以內(nèi)
細(xì)胞規(guī)格：1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
培養(yǎng)基：1640+10%FBS +P/S+Taxol
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
運(yùn)輸方式：復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞
細(xì)胞貨期：現(xiàn)貨，1周左右
特別說明：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
細(xì)胞復(fù)蘇操作說明（針對(duì)凍存細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái)，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，水浴鍋，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基，胎牛血清，三抗
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需復(fù)蘇的細(xì)胞，移液槍，槍頭，離心管
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。
2、從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子，移液槍吸出細(xì)胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上完全培養(yǎng)基并混勻。
3、操作離心 ，調(diào)至 1000 轉(zhuǎn)/分 ，時(shí)長 10 分鐘
4、棄去上清液 ，重懸離心管底部細(xì)胞沉淀，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 完全培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
5、次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6、注意：凍存細(xì)胞建議三管一起復(fù)蘇到一個(gè) T25 培養(yǎng)瓶中
細(xì)胞傳代操作說明（貼壁細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達(dá)到 80% ，可進(jìn)行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì) ，吸出完全培養(yǎng)基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具體時(shí)間視細(xì)胞而定），后用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細(xì)胞，鋪至 2 個(gè) T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：消化時(shí)間不易過長，消化前血清成分務(wù)必去除干凈，終止消化請(qǐng)用新鮮完全培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。
細(xì)胞傳代操作說明（懸浮細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清，三抗
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、細(xì)胞于培養(yǎng)箱中，密度達(dá)到懸浮細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)（沉降后可鋪滿底面），可進(jìn)行傳代。
2、按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì)，吹打均勻，吸出完全培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細(xì)胞，鋪至 2 個(gè)T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 完全培養(yǎng)基。
3、注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。
細(xì)胞凍存操作說明
實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái)，CO2 培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO
實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需凍存的細(xì)胞，移液槍，槍頭，離心管，凍存管，記號(hào)筆
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、取待凍存的細(xì)胞（按 T25 計(jì) ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細(xì)胞。如果是懸浮生長的細(xì)胞，則可直接離心收集細(xì)胞。
2、加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細(xì)胞懸液。
3、細(xì)胞懸液裝入 3 支凍存管中。
4、凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5～2 h ，再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h 后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(- 196℃) ，并登記。
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