小鼠心肌細胞的性質(zhì)與用途及生產(chǎn)工藝與使用方法！
小楊 / 2024-10-14 08:57:23
一、細胞描述
小鼠心肌細胞取自SPF級的新生1天的小鼠心臟，用心肌細胞完全培養(yǎng)基進行原代培養(yǎng)和傳代。規(guī)格：106/管活力：＞90%代數(shù)：p0運輸：干冰運輸（凍存管）/常溫運輸（T-25培養(yǎng)瓶）。
二、應(yīng)用范圍
本產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人或動物體外治療與診斷。
三、知識概述
隨著“人類基因組計劃”完成，功能基因組時代的到來，探索基因的功能則顯得格外重要與緊迫。細胞轉(zhuǎn)染與轉(zhuǎn)基因小鼠則是探索基因功能的兩種重要技術(shù)。為了探索心肌中功能相關(guān)基因的作用，需要獲得高質(zhì)量與高產(chǎn)量的
小鼠心肌細胞。有實驗為觀測模擬失重小鼠心肌細胞功能的變化，須建立完善的小鼠心肌細胞分離技術(shù)，為后續(xù)的實驗打下良好的基礎(chǔ)。以往普遍采用恒壓灌流的Langendorff裝置分離成年大鼠心肌細胞，其分離的產(chǎn)量與質(zhì)量不穩(wěn)定，主要原因是對消化終點的判斷不準確；小鼠心臟較小，且個體差異性較大，消化程度更難以掌握。近年來較多研究采用恒流灌流方法分離成年小鼠心肌細胞，可依賴灌流壓力決定消化終點，但細節(jié)不甚清楚。
四、細胞簡介
小鼠心肌細胞分離自心臟組織；由心肌細胞組成，是構(gòu)成心壁的主要成份。心肌有橫紋，受植物性神經(jīng)支配，屬不隨意肌。心肌細胞呈長圓柱狀，有分支互相吻合。心肌細胞連接處的肌膜形成階梯狀結(jié)構(gòu)，稱閏盤。閏盤對電流的阻抗低，興奮可以通過它由一個心肌細胞傳播到另一個心肌細胞。因此，整個心房和心室可看成是兩個機能上相互聯(lián)系的合體細胞。
五、主要應(yīng)用
體外培養(yǎng)的
小鼠心肌細胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動，且心肌細胞的培養(yǎng)具有簡便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點。利用培養(yǎng)的小鼠心肌細胞在探索非血液動力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié)，研究心肌細胞的生物力學(xué)、凋亡、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理、信號通路、對作用于心臟的新藥進行篩選并對其安全性進行評價以及從培養(yǎng)的心肌細胞中提取有價值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
六、用途
小鼠心肌細胞分離自小鼠胚胎心臟組織，細胞呈多邊形等不規(guī)則形狀，2天以后大部分伸出偽足呈巴掌狀部分心肌細胞會出現(xiàn)搏動，成熟的心肌細胞增殖緩慢或不增殖。體外培養(yǎng)的小鼠心肌細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
七、使用方法
1、取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2、待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3、細胞傳代
1)吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4)待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
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