微生物實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌除菌器的使用與操作方法！
小楊 / 2024-11-07 09:09:52
百歐博偉生物：微生物廣泛存在于周圍環(huán)境中，其中有些又是病原微生物，從預(yù)防感染出發(fā)，醫(yī)務(wù)工作者必須嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，對(duì)所用的物品和工作環(huán)境進(jìn)行消毒滅菌，確保醫(yī)療與科研正常進(jìn)行。
消毒滅菌主要是通過(guò)理化因素使微生物的主要代謝發(fā)生障礙，或菌體蛋白質(zhì)變性凝固，或破壞其遺傳物質(zhì)，導(dǎo)致微生物死亡。這里主要介紹物理因素殺滅微生物的幾種方法，以及相關(guān)器材的使用。
一、高壓蒸汽滅菌器
1、構(gòu)造：高壓蒸汽滅菌器是一個(gè)雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，外層堅(jiān)固厚實(shí)，其上方有金屬厚蓋，蓋旁附有螺旋，借以緊閉蓋門，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽壓力升高，隨著其溫度亦相應(yīng)地增高。
高壓蒸汽滅菌器上裝有排氣閥門、安全活塞，以調(diào)節(jié)蒸汽壓力。有溫度計(jì)及壓力表，以表示內(nèi)部的溫度和壓力。滅菌器內(nèi)裝有帶孔的金屬擱板，用以放置要滅菌物體。
2、用法：加水至外筒內(nèi)，被滅菌物品放入內(nèi)筒。蓋上滅菌器蓋，擰緊螺旋使之密閉。滅菌器下用煤氣或電爐等加熱，同時(shí)打開(kāi)排氣閥門，排凈其中冷空氣，否則壓力表上所示壓力并非全部是蒸汽壓力，滅菌將不完全。
待冷空氣全部排出后（即水蒸氣從排氣閥中連續(xù)排出時(shí)），關(guān)閉排氣閥。繼續(xù)加熱，待壓力表漸漸升至所需壓力時(shí)(一般是101.53 kPa，即15磅/英寸2，溫度為121.3℃)，調(diào)解爐火，保持壓力和溫度（注意壓力不要過(guò)大，以免發(fā)生意外），維持15~30 min。滅菌時(shí)間到達(dá)后，停止加熱，待壓力降至零時(shí)，慢慢打開(kāi)排氣閥，排除余氣，開(kāi)蓋取物。切不可在壓力尚未降低為零時(shí)突然打開(kāi)排氣閥門，以免滅菌器中液體噴出。
高壓蒸汽滅菌法為濕熱滅菌法，其優(yōu)點(diǎn)有三：一濕熱滅菌時(shí)菌體蛋白容易變性，二濕熱穿透力強(qiáng)，三蒸氣變成水時(shí)可放出大量熱增強(qiáng)殺菌效果，因此，它是效果最好的滅菌方法。凡耐高溫和潮濕的物品，如培養(yǎng)基、生理鹽水、衣服、紗布、棉花、敷料、玻璃器材、傳染性污物等都可應(yīng)用本法滅菌。
目前已出現(xiàn)全自動(dòng)電熱高壓蒸汽滅菌器，操作簡(jiǎn)單，使用安全。
二、干熱滅菌器(烤箱)
1、干熱滅菌器是由雙層鐵板制成的方形金屬箱，外壁內(nèi)層裝有隔熱的石棉板。箱底下放置大型火爐，或在箱壁中裝置電熱線圈。內(nèi)壁上有數(shù)個(gè)孔，供流通空氣用。箱前有鐵門及玻璃門，箱內(nèi)有金屬箱板架數(shù)層。電熱烤箱的前下方裝有溫度調(diào)節(jié)器，可以保持所需的溫度。
2、用法：將培養(yǎng)皿、吸管、試管等玻璃器材包裝后放入箱內(nèi)，閉門加熱。當(dāng)溫度上升至160～170℃時(shí)，保持溫度2 h，到達(dá)時(shí)間后，停止加熱，待溫度自然下降至40℃以下，方可開(kāi)門取物，否則冷空氣突然進(jìn)入，易引起玻璃炸裂；且熱空氣外溢，往往會(huì)灼傷取物者的皮膚。一般吸管、試管、培養(yǎng)皿、凡士林、液體石蠟等均可用本法滅菌。
三、除菌濾器
除菌濾器簡(jiǎn)稱濾菌器。種類很多，孔徑非常小，能阻擋細(xì)菌通過(guò)。它們可用陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃屑等制成。下面介紹幾種常用的濾菌器。
1、構(gòu)造
①賽氏(Seitz)濾菌器：由三部分組成。上部的金屬圓筒，用以盛裝將要濾過(guò)的液體；下部的金屬托盤及漏斗，用以接受濾出的液體；上下兩部分中間放石棉濾板，濾板按孔徑大小可分為三種：K濾孔最大，供澄清液體之用；EK濾孔較小，供濾過(guò)除菌；EK-S濾孔更小，可阻止一部分較大的病毒通過(guò)。濾板依靠側(cè)面附帶的緊固螺旋擰緊固定。
②玻璃濾菌器：由玻璃制成。濾板采用細(xì)玻璃砂在一定高溫下加壓制成?？讖接?.15～250 μm不等，分為G1、G2、G3、G4、G5、G6六種規(guī)格，后兩種規(guī)格均能阻擋細(xì)菌通過(guò)。
③薄膜濾菌器：由塑料制成。濾菌器薄膜采用優(yōu)質(zhì)纖維濾紙，用一定工藝加壓制成?？讖剑?00 nm，能阻擋細(xì)菌通過(guò)。
2、用法：將清潔的濾菌器(賽氏濾菌器和薄膜濾菌器須先將石棉板或?yàn)V菌薄膜放好，擰牢螺旋)和濾瓶分別用紙或布包裝好，用高壓蒸汽滅菌器滅菌。再以無(wú)菌操作把濾菌器與濾瓶裝好，并使濾瓶的側(cè)管與緩沖瓶相連，再使緩沖瓶與抽氣機(jī)相連。
將待濾液體倒入濾菌器內(nèi)，開(kāi)動(dòng)抽氣機(jī)使濾瓶中壓力減低，濾液則徐徐流入濾瓶中。濾畢，迅速按無(wú)菌操作將濾瓶中的濾液放到無(wú)菌容器內(nèi)保存。濾器經(jīng)高壓滅菌后，洗凈備用。
3、用途：用于除去混雜在不耐熱液體（如血清、腹水、糖溶液、某些藥物等）中的細(xì)菌。
四、紫外線燈的使用
紫外線中波長(zhǎng)為240～280 nm者具有殺菌能力，其中265～266 nm的殺菌作用最強(qiáng)。醫(yī)學(xué)上常使用紫外線燈產(chǎn)生紫外線進(jìn)行消毒滅菌。常用的是水銀燈，燈管由石英玻璃制成，管內(nèi)充滿壓強(qiáng)為266 Pa的氬和幾滴水銀。
其殺菌作用主要是因?yàn)镈NA吸收了紫外線引起胸腺嘧啶形成二聚體，從而干擾了DNA的復(fù)制，輕則發(fā)生突變，重則導(dǎo)致死亡。紫外線殺菌力強(qiáng)而穩(wěn)定，但穿透力弱，不能透過(guò)普通玻璃和有色紙張，因此，只適用于直接照射的物體表面消毒或空氣消毒。
使用方法：將涂有細(xì)菌的平皿放置在距紫外線60～100 cm處，直接受紫外線照射30 min后，37℃孵育24h后觀察生長(zhǎng)情況。
結(jié)果：紫外燈管直接照射處無(wú)菌生長(zhǎng)，如用玻璃和黑紙遮蓋，則有菌生長(zhǎng)。
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