黃暗青霉的背景知識(shí)與應(yīng)用研究及注意事項(xiàng)有哪些？
小楊 / 2024-11-18 08:41:30
黃暗青霉，本種的菌絲體、菌落反面、滲出液和可搭性色素通常都呈現(xiàn)不同程度的黃色，分生孢子呈現(xiàn)球形或近球形，且小等特征顯著。主要用于分類(lèi)，研究。
一、產(chǎn)品信息
規(guī)格：凍干粉
拉丁屬名：Penicillium Citreonigrum
拉丁名稱(chēng)：Penicillium citreonigrum
來(lái)源歷史：←中科院微生物研究所←CBS
收藏時(shí)間：2007/7/9
原產(chǎn)國(guó)：扎伊爾
資源歸類(lèi)編碼：15151913115
模式菌株：模式菌株
主要用途：分類(lèi)；研究
特征特性：菌落直徑53－55mm，顏色深灰綠到深綠，較薄，表面具不規(guī)則放射狀皺紋，微具同心環(huán)紋，菌落質(zhì)地為粉末狀，無(wú)滲出液，無(wú)可溶性色素，菌落反面顏色為栗棕色。分生孢子少量，閉囊殼呈球形，直徑20－30μm，有大量子囊，直徑1.5－2.5μm。
生物危害程度：四類(lèi)
培養(yǎng)基編號(hào)：CM0072
培養(yǎng)基名稱(chēng)：麥芽膏瓊脂(Malt Extract Agar)
培養(yǎng)基成分：麥芽膏 20.0g，瓊脂 20.0g，自來(lái)水 1.0L，自然pH。
培養(yǎng)溫度：25℃
需氧類(lèi)型：好氧
分離基物：土壤
采集地：加丹加省
保存方法：真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：分類(lèi)；研究；
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、背景知識(shí)
菌落在CA 上 25℃培養(yǎng) 12 天，直徑 14-25 (-30) mm，具放射狀皺紋，有的分離物在中心有臍狀突起或凹陸而其他部分則近于平坦；質(zhì)地絮狀或兼有少量絨狀；分生抱子結(jié)構(gòu)較少或較多，分生抱子面灰藍(lán)色至灰綠色，近于淡橄欖灰色、橄欖灰色；菌絲體黃色產(chǎn)生大量或較少的談黃色滲出液滴，偶有分離物則缺乏；反面一致呈現(xiàn)鮮黃或綠黃色；可溶性色素顯著，且類(lèi)似反面的顏色。
菌落在CYA 上 25℃培養(yǎng) 7 天，直徑 18-23mm，放射狀皺紋較多或較少，有的分離物在中心有臍狀突起而其他部分則平坦：質(zhì)地絮狀或兼有少量緘狀；分生于孢子結(jié)構(gòu)較少或在局部面上較多，分生孢子面灰藍(lán)色或藍(lán)綠色，近于淡礦灰色或談灰橄欖色；菌絲體淺黃色至黃色；滲出液較多或大量，黃色或帶綠黃色；反面鮮黃色或桶黃色；可需性色素黃色或綠黃色。
菌落在WA上25℃培養(yǎng)7天，直徑21-26mm，有放射狀皺紋或近于平坦，有的分離物較厚或很厚，疏松的氣生菌絲體可達(dá)4mm厚而邊緣則較?。嘿|(zhì)地絮狀兼有少量繩狀；分生孢子結(jié)構(gòu)較多或大量產(chǎn)生，分生抱子面藍(lán)綠色，近于豆綠色或談灰橄欖色；捧出液大量產(chǎn)生，甚至掩蓋了全部皺紋，黃色或黃綠色，而有的分離物則少甚至缺乏E反面黃褐、楠褐或微紅黃色；可洛性色素黃色。
菌落在G25N上25℃培養(yǎng)7天，直徑5-lOmm，放射狀皺紋少或近于平坦，也有整個(gè)菌落隆起者；質(zhì)地絮狀至絨狀或兼有繩狀；通常產(chǎn)生較多的分生抱子結(jié)構(gòu)，分生抱子面藍(lán)綠色，近于豆綠色，也有的分離物尚未形成分生抱子結(jié)構(gòu)；滲出液缺乏反面淡黃色或楠黃色；可溶性色素波黃色或缺乏。
在CYA上5℃培養(yǎng)7天：通常萌發(fā)或形成微小菌落。
在CYA上37℃培養(yǎng)7天：直徑6-12mm，有規(guī)則或不規(guī)則的放射狀皺紋；質(zhì)地緘狀兼絮狀：分生抱子結(jié)構(gòu)少量，分生袍子面灰綠色；無(wú)滲出液；反面淺黃褐色；可溶性色素缺乏。也有不萌發(fā)的分離物。
分生孢子梗通常發(fā)生于氣生菌絲或拖曳的菌絲，發(fā)生于菌絲繩者少，抱梗莖10-80 （一100）×1. 6-2. 0 (-2. 5) µm，壁平滑，無(wú)囊狀膨大；帚狀枝單輪生，偶有?；鶢罘种螂p輪生；瓶梗每輪6一10個(gè)，6.0-9.0(-11)×1. 8-2. 2 (一2.5) µm, 瓶狀，梗頸短至較明顯；分生抱子呈現(xiàn)球形或近球形，1.8一2.5 (-2. 8) µm，壁平滑5分生抱子鏈?zhǔn)杷?、短，不?guī)則或近于圓柱狀。
新模式：IMI92209i。
分布：較廣布種，不常能分離。我國(guó)有河北小五臺(tái)山；湖北神農(nóng)架；廣西桂林市、憑祥市、南寧市；四川佛山；貴州江口縣；新疆吐魯番。
基物：土壤、燕麥、霉茶葉、霉黠菌、鳥(niǎo)尸體、鋸末、蟲(chóng)卵、蟲(chóng)糞和爛葉。
代謝產(chǎn)物：桶霉素（citrinin），黃綠青霉素 ( citreoviridin)，擰橡酸(citricacid)。
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱(chēng)種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、產(chǎn)品僅用于科研如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
四、使用范圍
（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分精確，重復(fù)性強(qiáng)，而且微生物在這類(lèi)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢。如高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。
（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類(lèi)培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營(yíng)養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，所以常被采用。
（3）半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分，如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類(lèi)培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要。
五、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃):是適用范圍最廣的微生物保存法。
六、注意事項(xiàng)
1）凍干粉首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無(wú)菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無(wú)菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過(guò) 2 支平板，操作完畢后盡快置于厭氧環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；若需接種液體培養(yǎng)基，制作培養(yǎng)液時(shí)，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)液中的氧氣）；
2）經(jīng)過(guò)冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng)，這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間；若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢(xún)我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
4）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請(qǐng)?jiān)谑盏骄姾?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專(zhuān)業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類(lèi)的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
9）安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。
10）甘油管使用：使用本甘油菌時(shí)可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。
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