食品中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定方法和原理及操作步驟與流程！
小楊 / 2024-12-13 09:09:30
一、目的與要求
1、學(xué)習(xí)并掌握細(xì)菌的分離和活菌計(jì)數(shù)的基本方法和原理
2、了解菌落總數(shù)測(cè)定在對(duì)被樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)中的意義
二、原理
菌落總數(shù)是指食品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標(biāo)志，也可以應(yīng)用這一方法觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài)，以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。
菌落總數(shù)并不表示樣品中實(shí)際存在的所有細(xì)菌總數(shù)，菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類，所以有時(shí)被稱為雜菌數(shù)，需氧菌數(shù)等。
三、材料
1、食品檢樣
2、培養(yǎng)基
營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，無(wú)菌生理鹽水
3、其它
無(wú)菌培養(yǎng)皿，無(wú)菌移液管，無(wú)菌不銹鋼勺。
四、流程、步驟
1、取樣、稀釋和培養(yǎng)
①以無(wú)菌操作取檢樣25g（或ml），放于225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振要或研磨制成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以8000～10000r/min的速度處理1min，制成1:10的均勻稀釋液。
②用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管混合均勻，制成1:100的稀釋液。
③另取1ml滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次即換用1支10ml吸管。
④根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度，分別在制作10倍遞增稀釋的同時(shí)，以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。
⑤稀釋液移入平皿后，將涼至46℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，混合均勻。同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。
⑥待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h，取出計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。
2、菌落計(jì)數(shù)方法
作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平皿的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平皿平均菌落數(shù)。到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于0－4℃，但不要超過(guò)24h。
3、菌落計(jì)數(shù)報(bào)告方法
①平皿菌落數(shù)的選擇
選取菌落數(shù)在30～300之間的平皿作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。每一個(gè)稀釋度應(yīng)采用兩個(gè)平皿平均數(shù)，其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平皿作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，則可以計(jì)算半個(gè)平皿后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。
②稀釋度的選擇
a.應(yīng)選取平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度報(bào)告。
b.若有二個(gè)稀釋度均在30～300之間時(shí)，應(yīng)以二者比值決定，比值≤2取平均數(shù)，比值>2則其較小數(shù)字。
c.若所有稀釋度均>300，則取最高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。
d.若所有稀釋度均<30，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報(bào)告之。
e.若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則應(yīng)按<1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。
f.若所有稀釋度均不在30～300之間，有的>300，有的又<30，則應(yīng)以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。
③菌落計(jì)數(shù)報(bào)告方法
菌落數(shù)在1～100時(shí)，按實(shí)有數(shù)字報(bào)告，如大于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以10的指數(shù)表示。
五、結(jié)果
1、將實(shí)驗(yàn)測(cè)出的樣品數(shù)據(jù)以報(bào)表方式報(bào)告結(jié)果。
2、對(duì)樣品菌落總數(shù)作出是否符合衛(wèi)生要求的結(jié)論。
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