地芽胞桿菌屬的菌株培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及使用范圍！
小楊 / 2024-12-31 08:54:10
地芽孢桿菌是Geobacillus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國(guó)。主要用途為研究；教學(xué)。具體用途為產(chǎn)高溫蛋白酶。
一、菌種簡(jiǎn)介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Geobacillus Sp.
拉丁名稱(chēng)：Geobacillus sp.
模式菌株：否
來(lái)源歷史：←天津科技大學(xué)（11201）
收藏時(shí)間：2008/11/5
原始編號(hào)：Hpr4
原產(chǎn)國(guó)：中國(guó)
特征特性：細(xì)胞在10℃～50℃范圍內(nèi)均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度30℃-40℃；長(zhǎng)桿狀、具圓端、成對(duì)排列、運(yùn)動(dòng)、周生鞭毛、中生芽胞、但芽胞形成率較低、且芽胞橢圓形、孢囊不膨大；菌落呈淡黃色、不透明、邊緣圓整、表面不光滑、粗糙、不隆起。
參考用途：產(chǎn)高溫蛋白酶
生物危害程度：四類(lèi)
致病對(duì)象：無(wú)
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：0002 營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂（Nutrient Agar）
蛋白胨 5.0 g
牛肉浸粉 3.0 g
NaCl 5.0 g
瓊脂 15.0 g
蒸餾水 1000.0 mL
pH 7.0
培養(yǎng)芽胞桿菌時(shí)加入5 mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽胞。以上成分121℃，滅菌15 min。液體培養(yǎng)基不添加瓊脂。推薦使用成品培養(yǎng)基。
培養(yǎng)溫度：60 ℃
需氧類(lèi)型：好氧
用途：研究；產(chǎn)高溫蛋白酶
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、形態(tài)特征
革蘭氏陰性桿菌；白色;菌落呈球狀；平坦；邊緣不規(guī)則；多數(shù)運(yùn)動(dòng)；鞭毛典型側(cè)生；有機(jī)化能營(yíng)養(yǎng)；嚴(yán)格好氧或間性厭氧；形成內(nèi)生孢子；不形成絲狀體；暴露與空氣中不妨礙孢子的形成；營(yíng)養(yǎng)體的生長(zhǎng)70℃以上；對(duì)熱和其他致死因子抗性較強(qiáng)。
三、菌株培養(yǎng)
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級(jí)種）、原種（二級(jí)種）和栽培種（三級(jí)種）三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱(chēng)種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無(wú)菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、稱(chēng)量→溶化→調(diào)ph→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4、過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、使用范圍
（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分精確，重復(fù)性強(qiáng)，而且微生物在這類(lèi)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢。如高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。
（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類(lèi)培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營(yíng)養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，所以常被采用。
（3）半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分，如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類(lèi)培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要。
六、注意事項(xiàng)
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無(wú)菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請(qǐng)勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢(xún)我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；
3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；
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