細菌生物化學試驗的工作原理與操作方法及應用結(jié)果！
小楊 / 2025-02-05 09:16:32
百歐博偉生物：各種細菌具有各自獨特的酶系統(tǒng)，因而對底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也不同。用生物化學方法測定這些代謝產(chǎn)物，可用來區(qū)別和鑒定細菌的種類。利用生物化學方法來鑒別不同細菌，稱為細菌的生物化學試驗或稱生化反應。生物化學試驗的方法很多，主要有以下幾類。
碳水化合物的代謝試驗
1、糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗
（1）原理：不同種類細菌含有發(fā)酵不同糖（醇、苷）類的酶，因而對各種糖（醇、苷）類的代謝能力也有所不同，即使能分解某種糖（醇、苷）類，其代謝產(chǎn)物可因菌種而異。檢查細菌對培養(yǎng)基中所含糖（醇、苷）降解后產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的能力，可用以鑒定細菌種類。
(2)方法：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（如酚紅肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）類。所使用的糖（醇、苷）類有很多種，根據(jù)不同需要可選擇單糖、多糖或低聚糖、多元醇和環(huán)醇等，見表6-4-1。將待鑒定的純培養(yǎng)細菌接種入試驗培養(yǎng)基中，置35℃孵育箱內(nèi)孵育數(shù)小時到兩周（視方法及菌種而定）后，觀察結(jié)果。若用微量發(fā)酵管，或要求培養(yǎng)時間較長時，應注意保持其周圍的濕度，以免培養(yǎng)基干燥。
(3)結(jié)果：能分解糖（醇、苷）產(chǎn)酸的細菌，培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應（如酚紅變?yōu)辄S色），產(chǎn)氣的細菌可在小倒管（Durham小管）中產(chǎn)生氣泡，固體培養(yǎng)基則產(chǎn)生裂隙。不分解糖則無變化。
(4)應用：糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗，是鑒定細菌的生化反應試驗中最主要的試驗，不同細菌可發(fā)酵 不同的糖（醇、苷）類，如沙門菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖，大腸埃希菌則可發(fā)酵葡萄糖和乳糖。即便是兩種細菌均可發(fā)酵同一種糖類，其發(fā)酵結(jié)果也不盡相同，如志賀菌和大腸埃希菌均可發(fā)酵葡萄糖，但前者僅產(chǎn)酸，而后者則產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，故可利用此試驗鑒別細菌。
常用于細菌糖發(fā)酵試驗的糖、醇類
單糖 四碳糖：赤蘚糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖 阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖
雙糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖） 乳糖（葡萄糖＋半乳糖） 麥芽糖（兩分子葡萄糖）
三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）
多糖 菊糖（多分子果糖） 淀粉
醇類 側(cè)金盞花醇 衛(wèi)茅醇 甘露醇 山梨醇
非糖類 肌醇
2、葡萄糖代謝類型鑒別試驗
(1)原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型；能進行無氧降解的為發(fā)酵型；不分解葡萄糖的細菌為產(chǎn)堿型。發(fā)酵型細菌無論在有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖，而氧化型細菌在無氧環(huán)境中則不能分解葡萄糖。本試驗又稱氧化發(fā)酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）試驗，可用于區(qū)別細菌的代謝類型。
(2)方法：挑取少許純培養(yǎng)物（不要從選擇性平板中挑?。┙臃N2支HL培養(yǎng)管中，在其中一管加入高度至少為0.5cm的無菌液體石蠟以隔絕空氣（作為密封管），另一管不加（作為開放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。
(3)結(jié)果：兩管培養(yǎng)基均不產(chǎn)酸（顏色不變）為陰性；兩管都產(chǎn)酸（變黃）為發(fā)酵型；加液體石蠟管不產(chǎn)酸，不加液體石蠟管產(chǎn)酸為氧化型。
(4)應用：主要用于腸桿菌科與其它非發(fā)酵菌的鑒別。腸桿菌科、弧菌科細菌為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于鑒別葡萄球菌（發(fā)酵型）與微球菌（氧化型）。
3、甲基紅（MR）試驗
(1)原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進一步被分解為甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下時，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)（如醇、醛、酮、氣體和水），培養(yǎng)基pH在 5.4以上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。
(2)方法：將待試菌接種于葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培養(yǎng)基中滴加5~6滴甲基紅指示劑，立即觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判定：呈現(xiàn)紅色者為陽性，桔黃色為陰性，桔紅色為弱陽性。
(4)應用：常用于腸桿菌科內(nèi)某些種屬的鑒別，如
大腸埃希菌和
產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等為陽性。
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