微生物檢測(cè)中出現(xiàn)異?，F(xiàn)象平板如何進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)？
小楊 / 2025-02-17 09:09:15
百歐博偉生物：在微生物檢測(cè)中，遇到異常現(xiàn)象平板（如菌落過(guò)度蔓延、污染、菌落形態(tài)異常或培養(yǎng)基異常等）時(shí)，需采用特殊方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
以下是具體處理步驟和注意事項(xiàng)：
一、確認(rèn)異?，F(xiàn)象類型
1、菌落過(guò)度蔓延
現(xiàn)象：菌落連成一片，無(wú)法區(qū)分單個(gè)菌落。
原因：菌種擴(kuò)散性強(qiáng)（如變形桿菌）、培養(yǎng)基過(guò)濕、接種量過(guò)大。
2、菌落形態(tài)異常
現(xiàn)象：目標(biāo)菌與非目標(biāo)菌形態(tài)差異大（可能為污染）。
3、培養(yǎng)基異常
現(xiàn)象：培養(yǎng)基變色、渾濁、沉淀或干裂。
4、菌落密度異常
現(xiàn)象：菌落過(guò)密（>300 CFU/平板）或過(guò)疏（<10 CFU/平板）。
二、異常平板的處理與計(jì)數(shù)方法
1、菌落過(guò)度蔓延
分區(qū)計(jì)數(shù)法：
選擇蔓延區(qū)域邊緣的分散菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，僅統(tǒng)計(jì)獨(dú)立菌落。
若蔓延區(qū)域占平板面積>50%，需報(bào)告為“蔓延菌落”（TMTC：Too Many To Count），并重新稀釋樣品。
表面滅菌法（僅限特定菌種）：
覆蓋一層無(wú)菌瓊脂（45-50℃）固定菌落，冷卻后計(jì)數(shù)下層分散菌落。
2、疑似污染或菌落形態(tài)異常
選擇性培養(yǎng)基驗(yàn)證：
將可疑菌落轉(zhuǎn)接到選擇性培養(yǎng)基（如EMB、SS瓊脂）確認(rèn)是否為非目標(biāo)菌。
染色鑒定：
使用革蘭染色、芽孢染色等輔助判斷，排除污染菌。
計(jì)數(shù)原則：
僅計(jì)數(shù)符合目標(biāo)菌特征的菌落，其余標(biāo)記為污染并記錄。
3、培養(yǎng)基異常
物理干擾（如沉淀）：
使用立體顯微鏡或傾斜平板觀察，排除沉淀干擾。
化學(xué)干擾（如顏色變化）：
通過(guò)空白對(duì)照比對(duì)，確認(rèn)是否為菌落代謝產(chǎn)物導(dǎo)致的變色。
4、高密度或低密度菌落
高密度（>300 CFU）：
報(bào)告為“不可計(jì)數(shù)”（TNTC），選擇更高稀釋度的平板重新計(jì)數(shù)。
低密度（<10 CFU）：
結(jié)合多個(gè)稀釋度計(jì)算加權(quán)平均值，或按檢測(cè)下限報(bào)告（如“<10 CFU/mL”）。
三、特殊情況處理
1、菌落重疊但可辨：
統(tǒng)計(jì)所有可見(jiàn)獨(dú)立菌落，相鄰菌落間距<2 mm時(shí)按1個(gè)計(jì)算。
2、鏈狀菌落：
視為單個(gè)菌落（除非明顯由多個(gè)菌體形成）。
3、微型菌落（<0.5 mm）：
使用立體顯微鏡（10-15倍放大）輔助計(jì)數(shù)。
四、記錄與報(bào)告
1、明確標(biāo)注異?，F(xiàn)象：
記錄平板狀態(tài)（如“蔓延生長(zhǎng)”“疑似污染”）。
2、計(jì)算公式調(diào)整：
若僅部分稀釋度可用，需注明數(shù)據(jù)來(lái)源（如“基于10??稀釋度計(jì)數(shù)”）。
3、結(jié)果有效性說(shuō)明：
異常平板數(shù)據(jù)需備注可能誤差，必要時(shí)重新實(shí)驗(yàn)。
五、預(yù)防措施
優(yōu)化稀釋度：對(duì)未知樣品進(jìn)行梯度稀釋（建議3個(gè)連續(xù)稀釋度）。
控制接種量：確保每平板菌落數(shù)在30-300 CFU之間。
使用抑制擴(kuò)散劑：添加TTC（氯化三苯基四氮唑）或0.1%脫氧膽酸鈉抑制蔓延。
嚴(yán)格無(wú)菌操作：避免污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性/陰性。
六、注意事項(xiàng)
若異常平板無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，需重新制備樣品并復(fù)測(cè)。
參考標(biāo)準(zhǔn)：遵循ISO 7218、FDA BAM或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)部SOP要求。
通過(guò)以上方法，可在異常情況下最大限度保證菌落計(jì)數(shù)的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。
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