預(yù)防細(xì)胞實(shí)驗(yàn)超凈工作臺(tái)內(nèi)支原體污染的方法與策略！
小楊 / 2025-04-09 09:26:58
百歐博偉生物：在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，支原體污染是一個(gè)普遍且棘手的問題。據(jù)估計(jì)，細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染率可高達(dá)15-35%，甚至在某些情況下達(dá)到63%。由于支原體感染難以通過肉眼檢測(cè)，且對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)率影響較小，因此很容易被忽視，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本文旨在探討如何有效預(yù)防細(xì)胞實(shí)驗(yàn)超凈工作臺(tái)內(nèi)發(fā)生支原體污染。
1、控制環(huán)境污染
環(huán)境是支原體污染的主要來源之一。因此，控制環(huán)境污染是預(yù)防支原體污染的首要任務(wù)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持整潔，定期清潔和消毒，包括環(huán)境空氣消毒、物體表面消毒、生物安全柜或超凈工作臺(tái)滅菌及培養(yǎng)箱消毒。目前，過氧化氫干霧滅菌技術(shù)被認(rèn)為是替代甲醛熏蒸的有效消毒方式，其滅菌效果全面徹底，不留死角。
2、嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作
實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范是導(dǎo)致支原體污染的重要原因。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)執(zhí)行良好的細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范，包括一次只培養(yǎng)一個(gè)細(xì)胞系，清晰標(biāo)記并專用移液器和吸頭，避免交叉污染。同時(shí)，應(yīng)定期維護(hù)移液器和液體處理控制器，減少液體溢漏和飛濺，從而降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
3、保證無菌環(huán)境
細(xì)胞培養(yǎng)和器材的無菌狀態(tài)是預(yù)防支原體污染的關(guān)鍵。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)使用無菌耗材，并在使用前進(jìn)行高壓滅菌處理。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)試劑和培養(yǎng)基，應(yīng)使用0.1μm孔徑的無菌過濾器進(jìn)行過濾，以有效防止支原體通過氣溶膠傳播。
4、通風(fēng)與防護(hù)
通風(fēng)是預(yù)防支原體污染的重要手段。在細(xì)胞間工作臺(tái)四周的通風(fēng)應(yīng)保持暢通，紫外滅菌時(shí)和做實(shí)驗(yàn)時(shí)均應(yīng)開啟通風(fēng)設(shè)備。75%的循環(huán)風(fēng)可以有效阻止支原體進(jìn)入工作區(qū)域。此外，使用支原體專用殺除劑的濕巾對(duì)工作臺(tái)、超凈臺(tái)、培養(yǎng)箱等細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行定期消毒，也是有效預(yù)防支原體污染的措施。
5、支原體檢測(cè)與清除
定期檢測(cè)所有細(xì)胞系的支原體污染情況，尤其是新細(xì)胞系，是預(yù)防支原體污染的必要措施。將新細(xì)胞系隔離在單獨(dú)的培養(yǎng)箱中，直到明確證明其未受支原體污染。若細(xì)胞發(fā)生支原體污染，應(yīng)使用有效的支原體清除試劑進(jìn)行清除?；诮囟虃?cè)耳素類衍生物和四環(huán)素衍生物的抗生素溶液聯(lián)合使用，可以取得良好的效果。
6、結(jié)論
預(yù)防細(xì)胞實(shí)驗(yàn)超凈工作臺(tái)內(nèi)發(fā)生支原體污染是一個(gè)綜合性的任務(wù)，需要控制環(huán)境污染、嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作、保證無菌環(huán)境、加強(qiáng)通風(fēng)與防護(hù)以及定期檢測(cè)與清除支原體。通過執(zhí)行這些措施，可以顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的支原體污染及傳播風(fēng)險(xiǎn)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
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