支原體污染對細胞培養(yǎng)的影響與預防及處理與檢測方法！
小楊 / 2025-05-19 09:55:35
百歐博偉生物：支原體污染對細胞培養(yǎng)結(jié)果具有顯著影響，具體表現(xiàn)及應對措施如下：
一、支原體污染的影響
1、細胞生長異常：
增殖減緩或停滯：支原體競爭營養(yǎng)（如氨基酸、核苷酸），導致細胞生長受阻。
形態(tài)改變：細胞可能變圓、收縮或出現(xiàn)空泡化。
2、代謝干擾：
消耗關鍵營養(yǎng)物質(zhì)（如葡萄糖、精氨酸），改變培養(yǎng)基pH值。
釋放有毒代謝產(chǎn)物（如過氧化氫），損傷細胞膜或DNA。
3、實驗數(shù)據(jù)失真：
基因表達異常：干擾細胞信號通路，導致mRNA和蛋白表達異常。
藥物反應偏差：影響藥物敏感性測試結(jié)果（如化療藥效評估）。
4、隱蔽性與傳播風險：
支原體體積?。?.2-0.3 μm），常規(guī)顯微鏡難以檢測，易通過氣溶膠或操作交叉污染擴散。
二、檢測方法
1、PCR檢測：快速（2-3小時）、高靈敏度（可檢測低至1-10 CFU/mL），常用特異性引物。
2、熒光染色法：使用Hoechst 33342染色DNA，熒光顯微鏡下可見支原體顆粒（需高倍鏡觀察）。
3、培養(yǎng)法：耗時（2-4周），需專用培養(yǎng)基，適合科研級驗證。
三、處理與預防
1、污染后處理：
清除試劑：（針對支原體核糖體，使用7-14天），需驗證細胞毒性。
徹底滅菌：丟棄污染細胞，對培養(yǎng)箱、試劑進行滅活處理（如過氧乙酸熏蒸）。
2、預防措施：
嚴格無菌操作：使用二級生物安全柜，定期更換HEPA濾膜。
定期檢測：每1-2個月PCR篩查，新進細胞系需隔離檢測。
使用滅活血清：γ射線處理的胎牛血清（FBS）降低污染風險。
細胞庫管理：凍存無污染主細胞庫，避免反復傳代。
四、特殊案例與注意事項
1、病毒生產(chǎn)：支原體可能抑制病毒包裝（如慢病毒產(chǎn)量下降50%以上）。
2、干細胞研究：污染導致多能性標志物表達異常，影響分化效率。
3、長期影響：即使清除，部分細胞可能遺留表觀遺傳改變（如甲基化模式異常）。
綜上，支原體污染對細胞實驗的威脅不容忽視，需通過系統(tǒng)性的檢測、清除及預防策略保障實驗可靠性。
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