平板菌落集中在一起的原因是什么及解決方法有哪些？
小楊 / 2025-06-12 09:32:42
百歐博偉生物：平板上菌落集中在一起（而不是均勻分布）的原因通常有以下幾種，主要與操作技術(shù)、培養(yǎng)基狀態(tài)和樣品本身有關(guān)：
1、涂布不均勻 (最常見原因)：
這是最普遍的原因。在涂布平板法操作中：
涂布棒/玻璃珠使用不當(dāng)：涂布棒沒有在瓊脂表面充分、均勻地來回涂抹，導(dǎo)致樣品液滴只在局部區(qū)域被推開，或者推開的范圍太小。
樣品吸收過多：如果樣品被瓊脂吸收過快（例如瓊脂表面太濕或溫度偏高），涂布還沒來得及充分展開，樣品就滲入瓊脂了。
涂布力度不均：涂布時用力不均，導(dǎo)致局部區(qū)域樣品被涂抹得更開或更集中。
涂布時間不足：涂布時間太短，樣品沒有足夠時間分散開。
2、樣品未充分混勻：
在進(jìn)行系列稀釋或涂布之前，原始樣品或稀釋液沒有充分振蕩或渦旋混勻。細(xì)菌細(xì)胞或菌團(tuán)沉在管底或聚集在局部，吸取的樣品實際上代表的是高濃度的局部區(qū)域，涂布后自然集中在平板上的某個位置。
3、平板表面過于潮濕：
倒好的平板在涂布前沒有充分干燥，瓊脂表面凝結(jié)有水滴或形成一層水膜。
當(dāng)樣品液滴加到濕潤表面時，容易擴(kuò)散不均勻或流向平板邊緣/低洼處，導(dǎo)致菌落沿著水痕或聚集在水流匯集的地方生長。
4、平板放置不水平：
在涂布后、瓊脂凝固前或培養(yǎng)期間，平板沒有保持水平放置。未凝固的瓊脂或表面的水分會帶著細(xì)菌細(xì)胞流向低的一側(cè)，導(dǎo)致菌落在低洼處聚集。
5、傾注法混勻不充分：
在傾注平板法中，將熔化的瓊脂與樣品混合后倒入平皿時，如果沒有充分旋動混勻（或在倒入平皿后沒有迅速水平旋轉(zhuǎn)混勻），細(xì)菌細(xì)胞會聚集在局部區(qū)域（尤其是底部中心或邊緣），導(dǎo)致菌落集中生長。
6、倒平板時瓊脂溫度過高：
在傾注法或制備平板時，如果熔化的瓊脂溫度過高（超過50°C），倒入含有樣品的平皿或與樣品混合時，局部區(qū)域的活菌可能被燙死。如果混勻不充分，未被燙死的細(xì)菌就可能集中在某個區(qū)域生長。
7、樣品本身特性：
細(xì)菌聚集性：某些細(xì)菌種類本身容易聚集成團(tuán)（如某些
鏈球菌、
葡萄球菌形成葡萄串狀或鏈狀）。即使經(jīng)過振蕩，這些菌團(tuán)也不易完全打散，涂布后菌團(tuán)所在位置就會長出密集的菌落。
生物膜片段：如果樣品來源于生物膜環(huán)境，可能含有未完全分散的生物膜碎片，涂布后會在局部形成密集菌落。
8、培養(yǎng)基缺陷：
瓊脂未完全溶解或有顆粒，導(dǎo)致表面不平整。
培養(yǎng)基成分分布不均勻（較少見）。
9、局部污染：
在操作過程中，某個局部區(qū)域被外源菌污染，導(dǎo)致該區(qū)域長出密集的雜菌菌落（但這通常與目標(biāo)菌的分布無關(guān)）。
10、總結(jié)關(guān)鍵點(diǎn)：
操作技術(shù)是主因：尤其是涂布/混勻不充分和平板表面過濕。
樣品狀態(tài)很重要：確保樣品充分混勻，無大菌團(tuán)。
平板條件需注意：保證平板表面干燥且放置水平。
11、如何避免：
練習(xí)涂布技術(shù)：確保涂布棒在瓊脂表面平穩(wěn)、均勻、充分地來回涂抹，覆蓋整個表面，并等待樣品被吸收。
充分混勻樣品：在稀釋和取樣前，務(wù)必徹底振蕩或渦旋樣品管。
干燥平板：倒好的平板在涂布前，倒置在培養(yǎng)箱中或超凈工作臺中風(fēng)干一段時間（通常30分鐘左右，避免過度干燥），直到表面無明顯水珠或水膜。
保持水平：操作和培養(yǎng)過程中確保平板始終水平放置。
控制瓊脂溫度：傾注法時，瓊脂冷卻到約45-50°C（手摸溫?zé)岬粻C）再與樣品混合或倒入平皿，并迅速充分混勻。
檢查樣品：如果目標(biāo)菌本身易聚集，可嘗試更劇烈的振蕩、使用玻璃珠或加入少量無菌吐溫80（表面活性劑）幫助分散（需確認(rèn)不影響生長）。
通過注意這些操作細(xì)節(jié)，通常可以解決菌落集中分布的問題，獲得菌落均勻分散的單菌落平板。
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