細菌莢膜染色技術的原理與方法及注意事項與應用場景！
小楊 / 2025-06-24 08:59:47
百歐博偉生物：細菌莢膜染色是一種特殊的微生物學染色技術，用于觀察細菌細胞外層的莢膜（由多糖或多肽組成的粘液層）。由于莢膜不易著色且親水性強，常規(guī)染色法（如革蘭氏染色）無法使其顯色，因此需采用負染色法（背景染色法） 來凸顯其透明結構。
一、染色原理
1、負染色原理：
使用深色染料（如印度墨汁、苯胺黑、臺盼藍）將背景染成深色。
莢膜本身不著色，在深色背景下呈現(xiàn)為菌體周圍的透明亮圈。
菌體則通過簡單染色（如結晶紫、沙黃）著色，形成對比。
2、莢膜特性：
莢膜由水溶性多糖組成，染料無法滲透或結合。
常規(guī)加熱固定會破壞莢膜結構，因此染色過程需避免加熱。
二、常用方法
1、印度墨汁法（濕墨水法）
步驟：
載玻片上加1滴印度墨汁。
將細菌培養(yǎng)物（或菌落）與墨汁混合均勻。
蓋上蓋玻片，輕壓使混合液成薄層。
直接油鏡觀察：菌體深色，背景黑色，莢膜為透明暈圈。
2、改良Anthony莢膜染色法（干法）
步驟：
制涂片：菌懸液涂于載玻片，自然風干（不可加熱固定）。
染菌體：滴加1%結晶紫染5–7分鐘。
沖洗：用20%硫酸銅溶液輕輕沖洗染液（不可用水沖，避免莢膜溶解）。
吸干、油鏡觀察：菌體紫色，背景淡藍色，莢膜為無色透明圈。
3、苯胺黑負染色法
步驟：
載玻片一端加1滴5%苯胺黑水溶液。
取少量菌苔與染料混勻，推成薄涂片。
自然風干后油鏡觀察：背景灰黑，菌體灰白，莢膜透明。
三、關鍵注意事項
避免加熱固定：高溫會使莢膜收縮或破壞。
不可水洗：水會溶解莢膜多糖，導致結構消失。
菌量控制：菌苔過厚會導致背景雜亂，難以觀察。
染色時間：負染色需快速操作，避免干燥過程中莢膜變形。
四、應用場景
工業(yè)菌株篩選：產莢膜菌株可用于生產多糖（如黃原膠）。
生物膜研究：觀察細菌在表面的粘附結構。
五、結果示例
組分 顏色表現(xiàn)
細菌細胞 紫色/藍色（取決于染色劑）
莢膜 無色透明圈（包圍菌體）
背景 黑色/深灰色（負染色劑）
常見錯誤：誤將未染色的細胞碎片或氣泡當作莢膜。需結合菌體形態(tài)綜合判斷。
掌握莢膜染色技術對理解細菌的致病機制及環(huán)境適應性至關重要。
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