細(xì)菌莢膜染色技術(shù)的原理與方法及注意事項(xiàng)與應(yīng)用場(chǎng)景！
小楊 / 2025-06-24 08:59:47
百歐博偉生物：細(xì)菌莢膜染色是一種特殊的微生物學(xué)染色技術(shù)，用于觀察細(xì)菌細(xì)胞外層的莢膜（由多糖或多肽組成的粘液層）。由于莢膜不易著色且親水性強(qiáng)，常規(guī)染色法（如革蘭氏染色）無(wú)法使其顯色，因此需采用負(fù)染色法（背景染色法） 來(lái)凸顯其透明結(jié)構(gòu)。
一、染色原理
1、負(fù)染色原理：
使用深色染料（如印度墨汁、苯胺黑、臺(tái)盼藍(lán)）將背景染成深色。
莢膜本身不著色，在深色背景下呈現(xiàn)為菌體周?chē)耐该髁寥Α?/div>
菌體則通過(guò)簡(jiǎn)單染色（如結(jié)晶紫、沙黃）著色，形成對(duì)比。
2、莢膜特性：
莢膜由水溶性多糖組成，染料無(wú)法滲透或結(jié)合。
常規(guī)加熱固定會(huì)破壞莢膜結(jié)構(gòu)，因此染色過(guò)程需避免加熱。
二、常用方法
1、印度墨汁法（濕墨水法）
步驟：
載玻片上加1滴印度墨汁。
將細(xì)菌培養(yǎng)物（或菌落）與墨汁混合均勻。
蓋上蓋玻片，輕壓使混合液成薄層。
直接油鏡觀察：菌體深色，背景黑色，莢膜為透明暈圈。
2、改良Anthony莢膜染色法（干法）
步驟：
制涂片：菌懸液涂于載玻片，自然風(fēng)干（不可加熱固定）。
染菌體：滴加1%結(jié)晶紫染5–7分鐘。
沖洗：用20%硫酸銅溶液輕輕沖洗染液（不可用水沖，避免莢膜溶解）。
吸干、油鏡觀察：菌體紫色，背景淡藍(lán)色，莢膜為無(wú)色透明圈。
3、苯胺黑負(fù)染色法
步驟：
載玻片一端加1滴5%苯胺黑水溶液。
取少量菌苔與染料混勻，推成薄涂片。
自然風(fēng)干后油鏡觀察：背景灰黑，菌體灰白，莢膜透明。
三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
避免加熱固定：高溫會(huì)使莢膜收縮或破壞。
不可水洗：水會(huì)溶解莢膜多糖，導(dǎo)致結(jié)構(gòu)消失。
菌量控制：菌苔過(guò)厚會(huì)導(dǎo)致背景雜亂，難以觀察。
染色時(shí)間：負(fù)染色需快速操作，避免干燥過(guò)程中莢膜變形。
四、應(yīng)用場(chǎng)景
工業(yè)菌株篩選：產(chǎn)莢膜菌株可用于生產(chǎn)多糖（如黃原膠）。
生物膜研究：觀察細(xì)菌在表面的粘附結(jié)構(gòu)。
五、結(jié)果示例
組分 顏色表現(xiàn)
細(xì)菌細(xì)胞 紫色/藍(lán)色（取決于染色劑）
莢膜 無(wú)色透明圈（包圍菌體）
背景 黑色/深灰色（負(fù)染色劑）
常見(jiàn)錯(cuò)誤：誤將未染色的細(xì)胞碎片或氣泡當(dāng)作莢膜。需結(jié)合菌體形態(tài)綜合判斷。
掌握莢膜染色技術(shù)對(duì)理解細(xì)菌的致病機(jī)制及環(huán)境適應(yīng)性至關(guān)重要。
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