蔗糖胰蛋白胨肉湯的試驗方法與現(xiàn)象及結果解讀與注意事項！
小楊 / 2025-06-25 09:27:49
蔗糖胰蛋白胨肉湯（Sucrose Tryptone Broth）是一種常用的液體培養(yǎng)基，主要用于檢測細菌是否能夠發(fā)酵蔗糖。其原理是利用細菌發(fā)酵蔗糖產生酸類物質，使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑變色，從而判斷發(fā)酵結果。同時，培養(yǎng)基中通常含有倒置的小發(fā)酵管，用于收集發(fā)酵過程中產生的氣體，以判斷是否產氣。
一、試驗方法
1、培養(yǎng)基制備：
成分：胰蛋白胨（提供氮源、碳源、維生素等）、蔗糖（唯一可發(fā)酵的碳水化合物）、酚紅（pH指示劑）、氯化鈉（維持滲透壓）、蒸餾水。
配制：按配方準確稱量各組分，溶解于蒸餾水中。
pH調整：用NaOH或HCl將培養(yǎng)基pH調整至7.4±0.2（此時酚紅呈紅色或橙紅色）。
分裝與滅菌：將培養(yǎng)基分裝至試管中，每管約5-10ml。在每支試管中放入一個倒置的小發(fā)酵管，確保其完全充滿培養(yǎng)基且無氣泡。在121°C (15 psi) 下高壓蒸汽滅菌15分鐘。滅菌后冷卻備用。
2、接種：
在無菌條件下，用接種環(huán)挑取待測細菌的純培養(yǎng)物（通常是一個分離良好的單菌落）。
將菌種接種到裝有蔗糖胰蛋白胨肉湯的試管中。輕輕旋轉試管或上下移動接種環(huán)使菌體混勻（避免劇烈震蕩導致倒管中有大氣泡殘留）。
同時接種一支未加糖的胰蛋白胨肉湯（基礎培養(yǎng)基）作為陰性對照（顏色應保持紅色不變），以及一支已知蔗糖陽性菌（如
大腸桿菌的部分菌株）和一支已知蔗糖陰性菌（如
志賀氏菌或
沙門氏菌）作為陽性對照和陰性對照。
3、培養(yǎng)：
將接種好的試管和對照管放入恒溫培養(yǎng)箱中。
通常在35-37°C下培養(yǎng)。
培養(yǎng)時間一般為18-24小時。如果24小時后無變化，可繼續(xù)培養(yǎng)至48小時再觀察，特別是對生長較慢的細菌。
4、觀察：
顏色變化：觀察培養(yǎng)基顏色的變化，特別注意與未接種管和陰性對照管比較。
氣體產生：觀察倒置的小發(fā)酵管內是否有氣泡聚集。氣泡體積占倒管體積的10%或以上通常被認為是陽性（產氣）。
二、現(xiàn)象與結果解讀
1、陽性反應（蔗糖發(fā)酵）：
產酸：細菌發(fā)酵蔗糖產生酸性代謝產物（如乳酸、乙酸等）。
現(xiàn)象：培養(yǎng)基中的酚紅指示劑由紅色/橙紅色變?yōu)辄S色（pH下降至6.8以下）。這是蔗糖發(fā)酵的主要標志。
產氣（可選）：如果發(fā)酵過程同時產生氣體（如CO?和H?）。
現(xiàn)象：倒置的小發(fā)酵管內出現(xiàn)氣泡（大小至少占倒管體積的10%）。
結果描述：蔗糖發(fā)酵陽性（A）或蔗糖發(fā)酵產酸產氣陽性（A/G）。
2、陰性反應（蔗糖不發(fā)酵）：
不產酸：細菌不能利用蔗糖作為碳源進行發(fā)酵，或者代謝途徑不產酸。
現(xiàn)象：培養(yǎng)基顏色保持不變（紅色或橙紅色），或有時因細菌分解蛋白胨產生堿性物質而變?yōu)楦畹募t色（紫紅色）（堿性反應）。倒管中沒有氣泡或氣泡體積小于10%。
結果描述：蔗糖發(fā)酵陰性（-）。
3、特殊情況：
產堿反應：如果細菌不能發(fā)酵蔗糖但能強烈分解培養(yǎng)基中的蛋白胨產生堿性產物，可能導致培養(yǎng)基由紅色變?yōu)樯罴t色或紫紅色。這也屬于蔗糖發(fā)酵陰性。
遲緩發(fā)酵：少數(shù)細菌可能在24小時內不發(fā)酵，但延長培養(yǎng)時間（如48小時）后出現(xiàn)黃色變化（陽性）。
微弱產氣：氣泡非常小（<10%倒管體積）通常視為不產氣（陰性）。
三、重要注意事項
無菌操作：整個接種過程必須嚴格無菌，避免污染導致假陽性或假陰性。
純培養(yǎng)物：必須使用待測細菌的純培養(yǎng)物進行接種，混合培養(yǎng)會導致結果無法解釋。
對照設置：設置未接種對照、陽性對照（已知蔗糖陽性菌）和陰性對照（已知蔗糖陰性菌）對于正確解讀結果至關重要。對照管的結果應符合預期。
正確判讀顏色：觀察顏色變化時，要在良好的白光下進行，并與對照管比較。注意區(qū)分黃色（酸性）、橙紅色（中性/初始狀態(tài)）和紅色/紫紅色（堿性）。
倒管氣泡：接種后和培養(yǎng)前，確保倒管內沒有殘留的大氣泡（小氣泡可以忽略）。培養(yǎng)后觀察到的氣泡應是發(fā)酵新產生的。
培養(yǎng)時間：嚴格遵守推薦的培養(yǎng)時間和溫度。過早或過晚觀察都可能導致誤判。
四、應用
腸桿菌科細菌的初步鑒定和分群（例如，大腸桿菌通常蔗糖陽性，而沙門氏菌和志賀氏菌通常蔗糖陰性）。
其他需氧和兼性厭氧細菌的糖發(fā)酵能力鑒定。
篩選能夠利用蔗糖作為碳源的細菌。
通過觀察
蔗糖胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)后的顏色變化和氣體產生情況，可以快速判斷細菌是否具有發(fā)酵蔗糖并產酸的能力，這是細菌生化鑒定中一項常用且重要的試驗。
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