酚紅煌綠瓊脂培養(yǎng)基的使用前準(zhǔn)備及結(jié)果觀察與判讀！
小楊 / 2025-07-25 09:20:40
酚紅煌綠瓊脂培養(yǎng)基主要用于分離培養(yǎng)
沙門氏菌（傷寒沙門氏菌除外），其使用需遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，以確保分離效果和結(jié)果準(zhǔn)確性。以下是詳細(xì)的使用方法：
一、使用前準(zhǔn)備
1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備
確認(rèn)培養(yǎng)基已正確制備并凝固：平板應(yīng)無裂痕、無污染（無雜菌菌落），表面平整濕潤但不積水。
若為預(yù)制平板，需在室溫下平衡 15-30 分鐘（避免低溫影響細(xì)菌復(fù)蘇）；若為自制平板，需確認(rèn)滅菌徹底且凝固完全。
2、樣品及工具準(zhǔn)備
樣品處理：根據(jù)檢測對象（如食品、糞便、飼料等）進(jìn)行前處理：
固體樣品：需均質(zhì)化后稀釋（如用無菌生理鹽水稀釋至合適濃度）；
液體樣品：可直接稀釋或離心富集；
必要時先經(jīng)增菌培養(yǎng)（如使用緩沖蛋白胨水、四硫磺酸鈉煌綠增菌液），提高沙門氏菌檢出率。
無菌工具：準(zhǔn)備滅菌的接種環(huán)、移液器、吸頭、培養(yǎng)皿等，避免操作污染。
二、接種操作
1、接種方法選擇
劃線接種（推薦）：用滅菌接種環(huán)蘸取少量處理后的樣品（或增菌液），在培養(yǎng)基表面進(jìn)行“分區(qū)劃線”，使細(xì)菌逐漸稀釋，最終形成單個菌落。
涂布接種：取 0.1-0.2mL 樣品稀釋液，滴在培養(yǎng)基表面，用無菌 L 型玻璃棒均勻涂布，適合樣品中菌量較少的情況。
2、注意事項(xiàng)
接種環(huán)需在火焰上滅菌，冷卻后再蘸取樣品（避免高溫殺死細(xì)菌）；
接種后避免平板傾斜，防止樣品液流淌導(dǎo)致菌落融合。
三、培養(yǎng)條件
將接種后的平板倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），放入 36±1℃的恒溫培養(yǎng)箱中。
培養(yǎng)時間：18-24 小時；若菌落生長不明顯，可延長至 48 小時（但需注意雜菌可能過度生長）。
培養(yǎng)環(huán)境：需氧培養(yǎng)（無需厭氧條件）。
四、結(jié)果觀察與判讀
1、菌落特征識別
沙門氏菌：典型菌落為粉白色、圓形、邊緣整齊、表面光滑，直徑約 1-2mm；菌落周圍培養(yǎng)基因細(xì)菌不發(fā)酵乳糖/蔗糖（不產(chǎn)酸），酚紅不變色，或因輕微產(chǎn)堿而呈淡紅色暈圈。
雜菌：
能發(fā)酵乳糖/蔗糖的細(xì)菌（如
大腸桿菌）：菌落呈黃色，周圍培養(yǎng)基因產(chǎn)酸變?yōu)辄S色；
被煌綠抑制的細(xì)菌：無菌落生長（如革蘭氏陽性菌、多數(shù)非沙門氏菌革蘭氏陰性菌）。
2、結(jié)果記錄
記錄菌落形態(tài)（顏色、大小、邊緣等）、數(shù)量及培養(yǎng)基顏色變化；
若有疑似沙門氏菌菌落，需挑取單個菌落進(jìn)行進(jìn)一步鑒定（如生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)），排除假陽性。
五、注意事項(xiàng)
安全性：煌綠有一定刺激性，操作時避免接觸皮膚和黏膜；廢棄培養(yǎng)基需高壓滅菌后再處理。
質(zhì)量控制：每次使用前可通過質(zhì)控菌株驗(yàn)證培養(yǎng)基有效性（如
鼠傷寒沙門氏菌應(yīng)生長良好，
大腸桿菌應(yīng)被部分抑制且菌落呈黃色）。
局限性：傷寒沙門氏菌可能被煌綠抑制，若需檢測傷寒沙門氏菌，需搭配其他培養(yǎng)基（如 SS 瓊脂）。
通過以上步驟，可有效利用酚紅煌綠瓊脂培養(yǎng)基分離
沙門氏菌，結(jié)合后續(xù)鑒定試驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)菌的準(zhǔn)確檢測。
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