陰溝腸桿菌分離瓊脂（ECIA）的設(shè)計(jì)原理及使用方法！
小楊 / 2025-08-07 09:36:48
陰溝腸桿菌分離瓊脂（ECIA，Enterobacter cloacae Isolation Agar）是一種用于選擇性分離和鑒別
陰溝腸桿菌的培養(yǎng)基，其設(shè)計(jì)基于陰溝腸桿菌的生化特性，能在復(fù)雜樣本中快速篩選目標(biāo)菌株。以下從原理和使用方法兩方面詳細(xì)介紹：
一、ECIA 的設(shè)計(jì)原理
ECIA 的核心原理是通過選擇性抑制劑抑制雜菌生長，同時(shí)利用陰溝腸桿菌特有的生化反應(yīng)進(jìn)行鑒別，具體如下：
1、選擇性成分
培養(yǎng)基中添加了特定抗生素（如頭孢菌素類）或化學(xué)抑制劑，可抑制革蘭氏陽性菌、其他非目標(biāo)革蘭氏陰性菌（如
大腸桿菌、
沙門氏菌等）的生長，僅允許陰溝腸桿菌等少數(shù)耐藥菌株存活。
2、鑒別成分
陰溝腸桿菌能產(chǎn)生β- 半乳糖苷酶和鳥氨酸脫羧酶等特異性酶，ECIA 中加入對應(yīng)的底物（如鳥氨酸）和指示劑（如酚紅）：
若菌株能分解 ONPG（鄰硝基苯 -β-D - 半乳糖苷），會(huì)產(chǎn)生黃色產(chǎn)物；
鳥氨酸脫羧酶可分解鳥氨酸產(chǎn)生堿性物質(zhì)，使培養(yǎng)基 pH 升高，指示劑酚紅由黃變紅。
因此，
陰溝腸桿菌在 ECIA 上通常形成黃色或橙紅色、邊緣整齊的菌落，而其他細(xì)菌可能不生長或形成顏色不同的菌落（如無色、粉色）。
二、ECIA 的使用方法
1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備
儲(chǔ)存條件：成品 ECIA 平板需在 2-8℃避光保存，避免凍結(jié)或反復(fù)升溫，保質(zhì)期通常為 1 個(gè)月。
預(yù)熱：使用前將平板從冰箱取出，室溫放置 30 分鐘，避免冷凝水影響接種。
2、樣本接種
樣本類型：適用于臨床標(biāo)本（如尿液、血液、痰液）、環(huán)境樣本（如水、土壤）或食品樣本等。
接種方法：
固體樣本：用無菌接種環(huán)取少量樣本，在平板表面劃線（如分區(qū)劃線法），確保菌落分散。
液體樣本：取 0.1-0.2mL 樣本，用 L 型玻璃棒均勻涂布于平板表面。
注意：接種后需待樣本吸收片刻，再倒置培養(yǎng)。
3、培養(yǎng)條件
溫度：35-37℃（陰溝腸桿菌最適生長溫度）。
時(shí)間：18-24 小時(shí)（若菌落不明顯，可延長至 48 小時(shí)，但需注意雜菌污染）。
環(huán)境：需有氧培養(yǎng)（陰溝腸桿菌為兼性厭氧菌，有氧條件下生長更佳）。
4、結(jié)果判讀
典型菌落：陰溝腸桿菌在 ECIA 上通常為圓形、光滑、邊緣整齊的黃色或橙紅色菌落（直徑 1-3mm），周圍培養(yǎng)基可能變色（如黃色暈圈）。
非典型菌落：其他細(xì)菌可能不生長，或形成無色、粉色、白色等非特征性菌落，需進(jìn)一步鑒定。
5、后續(xù)鑒定
對疑似陰溝腸桿菌菌落，需通過生化試驗(yàn)、質(zhì)譜分析或分子生物學(xué)方法確認(rèn)種屬，避免與其他腸桿菌科細(xì)菌（如
阪崎腸桿菌、
肺炎克雷伯菌）混淆。
三、注意事項(xiàng)
操作需嚴(yán)格無菌，避免污染環(huán)境或樣本。
若培養(yǎng)基出現(xiàn)干裂、霉斑或顏色異常（如背景色變深），需廢棄不用。
陰溝腸桿菌可能存在變異株，部分菌株生化特性不典型，需結(jié)合其他鑒定方法確認(rèn)。
通過以上步驟，可利用
ECIA 快速分離并初步鑒別陰溝腸桿菌，為臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測或食品安全檢測提供依據(jù)。
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