改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的制備方法與操作流程及質(zhì)量控制！
小楊 / 2025-08-15 09:01:32
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的制備需嚴(yán)格遵循配方比例、pH 調(diào)節(jié)、滅菌等步驟，以保證培養(yǎng)基的無菌性和適用性（主要用于真菌培養(yǎng)）。以下是詳細(xì)的制備流程：
一、制備前準(zhǔn)備
1、試劑與材料
配方成分（按 1000mL 培養(yǎng)基計(jì)）：
葡萄糖 20.0g
蛋白胨 5.0g
酵母浸出粉 2.0g
瓊脂 15.0g
純化水 1000mL
儀器：電子天平、燒杯、玻璃棒、pH 計(jì)（或精密 pH 試紙）、高壓蒸汽滅菌鍋、錐形瓶（或試劑瓶）、漏斗、滅菌培養(yǎng)皿等。
輔助工具：紗布、棉塞（或硅膠塞）、牛皮紙（或鋁箔）。
2、環(huán)境要求
稱量和配制操作在潔凈工作臺(tái)或無菌室進(jìn)行，避免雜菌污染。
所有玻璃器皿需提前清洗干凈并干燥。
二、具體制備步驟
1、稱量與溶解
按配方準(zhǔn)確稱取葡萄糖、蛋白胨、酵母浸出粉、瓊脂，依次加入盛有適量純化水（約 800mL）的燒杯中。
用玻璃棒攪拌均勻，置于石棉網(wǎng)或電熱板上加熱至沸騰，使所有成分（尤其是瓊脂）完全溶解（加熱時(shí)需不斷攪拌，防止瓊脂黏附燒杯底部導(dǎo)致焦糊）。
待溶液冷卻至 50℃左右，加純化水補(bǔ)足至 1000mL（因加熱過程中水分會(huì)蒸發(fā)，需補(bǔ)至原定體積）。
2、pH 調(diào)節(jié)
用 pH 計(jì)（或精密 pH 試紙）測(cè)定溶液 pH，用 1mol/L 鹽酸或 1mol/L 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 至 4.0~6.0（偏酸性環(huán)境，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，適合真菌）。
調(diào)節(jié)后再次攪拌均勻，確認(rèn) pH 符合要求。
3、分裝與滅菌
將配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝至錐形瓶中（避免瓊脂凝固），每瓶體積不超過容器容積的 2/3，瓶口塞緊棉塞，外包牛皮紙（或鋁箔），標(biāo)記名稱、配制日期。
采用高壓蒸汽滅菌：121℃、103.4kPa（15 磅）滅菌 20 分鐘（滅菌時(shí)間過長(zhǎng)可能破壞營養(yǎng)成分，過短則無法保證無菌）。
4、滅菌后處理
滅菌結(jié)束后，待滅菌鍋壓力降至 0、溫度降至 80℃以下時(shí)，取出錐形瓶，輕輕搖勻（使瓊脂分布均勻），避免劇烈晃動(dòng)導(dǎo)致氣泡產(chǎn)生。
若需立即倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至 50~60℃（手感微燙但不燙手）時(shí)，在潔凈工作臺(tái)中倒入滅菌培養(yǎng)皿（每皿約 15~20mL），蓋好皿蓋，水平放置待凝固（約 30~60 分鐘）。
若暫不使用：將滅菌后的培養(yǎng)基（未倒平板）在 4~20℃避光保存，避免凍結(jié)，使用前需重新加熱融化（可水浴加熱），待冷卻至 50~60℃后倒平板。
三、質(zhì)量控制
1、無菌檢查：取少量培養(yǎng)基（或倒好的平板）在 23~28℃培養(yǎng) 5~7 天，若無菌落生長(zhǎng)，說明滅菌合格。
2、適用性檢查：接種已知的真菌（如
白色念珠菌、
黑曲霉），在 23~28℃培養(yǎng)，觀察是否生長(zhǎng)良好（菌落形態(tài)典型），同時(shí)接種細(xì)菌（如
金黃色葡萄球菌），觀察是否被抑制（不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)微弱），以確認(rèn)培養(yǎng)基的選擇性和有效性。
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