改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)方法及具體操作步驟！
小楊 / 2025-08-27 08:58:03
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)是保證其選擇性（抑制細(xì)菌、促進(jìn)真菌生長(zhǎng)）的關(guān)鍵步驟，需在培養(yǎng)基成分完全溶解后、滅菌前進(jìn)行，具體方法如下：
一、調(diào)節(jié)前準(zhǔn)備
1、試劑準(zhǔn)備
酸堿調(diào)節(jié)劑：1mol/L 鹽酸溶液（HCl）和 1mol/L 氫氧化鈉溶液（NaOH），用于降低或升高 pH 值。
配制方法（以 1000mL 為例）：
1mol/L HCl：量取 82mL 濃鹽酸（密度 1.19g/mL，質(zhì)量分?jǐn)?shù) 37%），緩慢加入適量純化水，攪拌均勻后定容至 1000mL。
1mol/L NaOH：稱取 40g 氫氧化鈉固體，加入適量純化水溶解（注意放熱，可冷水浴降溫），冷卻后定容至 1000mL。
校準(zhǔn)工具：經(jīng)校準(zhǔn)的 pH 計(jì)（精度 ±0.02）或精密 pH 試紙（范圍 3.8~5.4，因目標(biāo) pH 為 4.0~6.0，此范圍更精準(zhǔn)）。
輔助工具：移液管（1mL、5mL）或膠頭滴管，玻璃棒，燒杯（用于分裝少量培養(yǎng)基供檢測(cè)）。
2、培養(yǎng)基狀態(tài)
確保培養(yǎng)基中所有成分（尤其是瓊脂）已完全溶解，且溶液處于溫?zé)釥顟B(tài)（避免瓊脂凝固，影響攪拌均勻性），此時(shí)溶液為澄清或輕微渾濁的液體。
二、具體調(diào)節(jié)步驟
1、初步測(cè)定 pH 值
用移液管取 5~10mL 待調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基溶液，轉(zhuǎn)移至潔凈小燒杯中（避免污染原溶液）。
若用 pH 計(jì)：將電極插入溶液中，輕輕攪拌（避免電極碰撞燒杯壁），待讀數(shù)穩(wěn)定后記錄初始 pH 值。
若用精密 pH 試紙：取一條試紙，蘸取少量培養(yǎng)基溶液，30 秒內(nèi)與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對(duì)比，讀取初始 pH 值。
2、分步調(diào)節(jié) pH 值
根據(jù)初始 pH 值與目標(biāo)值（4.0~6.0）的差異，選擇鹽酸或氫氧化鈉溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)：
若初始 pH > 6.0（偏堿）：用膠頭滴管或移液管向培養(yǎng)基中逐滴加入 1mol/L HCl，每加入 1~2 滴后，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆颍ㄕ麄€(gè)培養(yǎng)基溶液，而非僅小燒杯中的樣品），再次取樣測(cè)定 pH，重復(fù)操作直至 pH 降至 4.0~6.0 范圍內(nèi)。
若初始 pH < 4.0（偏酸）：用同樣方法逐滴加入 1mol/L NaOH，攪拌后復(fù)測(cè)，直至 pH 升至目標(biāo)范圍。
注意事項(xiàng)：
調(diào)節(jié)時(shí)需“少量多次”，避免一次性加入過(guò)多酸堿導(dǎo)致 pH 值劇烈波動(dòng)（如超過(guò)目標(biāo)范圍后需反向調(diào)節(jié)，可能影響培養(yǎng)基成分穩(wěn)定性）。
攪拌需充分，確保酸堿均勻分散在培養(yǎng)基中，否則局部濃度過(guò)高可能導(dǎo)致測(cè)定誤差。
3、最終確認(rèn) pH 值
當(dāng) pH 值穩(wěn)定在 4.0~6.0 范圍內(nèi)后，再次取樣復(fù)測(cè) 1~2 次，確認(rèn)讀數(shù)一致（pH 計(jì)需沖洗電極后再測(cè)，避免殘留影響），確保調(diào)節(jié)準(zhǔn)確。
三、調(diào)節(jié)后處理
pH 值調(diào)節(jié)完成后，需立即進(jìn)行分裝和滅菌（121℃、20 分鐘），避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致雜菌污染。滅菌后，培養(yǎng)基的 pH 值可能會(huì)有輕微變化（通常 ±0.2 范圍內(nèi)），屬于正常現(xiàn)象，不影響使用。
通過(guò)以上步驟，可精準(zhǔn)調(diào)節(jié)
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的 pH 值，為真菌的選擇性培養(yǎng)提供適宜環(huán)境。
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