改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)方法及具體操作步驟！
小楊 / 2025-08-27 08:58:03
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)是保證其選擇性（抑制細菌、促進真菌生長）的關(guān)鍵步驟，需在培養(yǎng)基成分完全溶解后、滅菌前進行，具體方法如下：
一、調(diào)節(jié)前準備
1、試劑準備
酸堿調(diào)節(jié)劑：1mol/L 鹽酸溶液（HCl）和 1mol/L 氫氧化鈉溶液（NaOH），用于降低或升高 pH 值。
配制方法（以 1000mL 為例）：
1mol/L HCl：量取 82mL 濃鹽酸（密度 1.19g/mL，質(zhì)量分數(shù) 37%），緩慢加入適量純化水，攪拌均勻后定容至 1000mL。
1mol/L NaOH：稱取 40g 氫氧化鈉固體，加入適量純化水溶解（注意放熱，可冷水浴降溫），冷卻后定容至 1000mL。
校準工具：經(jīng)校準的 pH 計（精度 ±0.02）或精密 pH 試紙（范圍 3.8~5.4，因目標 pH 為 4.0~6.0，此范圍更精準）。
輔助工具：移液管（1mL、5mL）或膠頭滴管，玻璃棒，燒杯（用于分裝少量培養(yǎng)基供檢測）。
2、培養(yǎng)基狀態(tài)
確保培養(yǎng)基中所有成分（尤其是瓊脂）已完全溶解，且溶液處于溫?zé)釥顟B(tài)（避免瓊脂凝固，影響攪拌均勻性），此時溶液為澄清或輕微渾濁的液體。
二、具體調(diào)節(jié)步驟
1、初步測定 pH 值
用移液管取 5~10mL 待調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基溶液，轉(zhuǎn)移至潔凈小燒杯中（避免污染原溶液）。
若用 pH 計：將電極插入溶液中，輕輕攪拌（避免電極碰撞燒杯壁），待讀數(shù)穩(wěn)定后記錄初始 pH 值。
若用精密 pH 試紙：取一條試紙，蘸取少量培養(yǎng)基溶液，30 秒內(nèi)與標準比色卡對比，讀取初始 pH 值。
2、分步調(diào)節(jié) pH 值
根據(jù)初始 pH 值與目標值（4.0~6.0）的差異，選擇鹽酸或氫氧化鈉溶液進行調(diào)節(jié)：
若初始 pH > 6.0（偏堿）：用膠頭滴管或移液管向培養(yǎng)基中逐滴加入 1mol/L HCl，每加入 1~2 滴后，用玻璃棒充分攪拌均勻（整個培養(yǎng)基溶液，而非僅小燒杯中的樣品），再次取樣測定 pH，重復(fù)操作直至 pH 降至 4.0~6.0 范圍內(nèi)。
若初始 pH < 4.0（偏酸）：用同樣方法逐滴加入 1mol/L NaOH，攪拌后復(fù)測，直至 pH 升至目標范圍。
注意事項：
調(diào)節(jié)時需“少量多次”，避免一次性加入過多酸堿導(dǎo)致 pH 值劇烈波動（如超過目標范圍后需反向調(diào)節(jié)，可能影響培養(yǎng)基成分穩(wěn)定性）。
攪拌需充分，確保酸堿均勻分散在培養(yǎng)基中，否則局部濃度過高可能導(dǎo)致測定誤差。
3、最終確認 pH 值
當(dāng) pH 值穩(wěn)定在 4.0~6.0 范圍內(nèi)后，再次取樣復(fù)測 1~2 次，確認讀數(shù)一致（pH 計需沖洗電極后再測，避免殘留影響），確保調(diào)節(jié)準確。
三、調(diào)節(jié)后處理
pH 值調(diào)節(jié)完成后，需立即進行分裝和滅菌（121℃、20 分鐘），避免長時間放置導(dǎo)致雜菌污染。滅菌后，培養(yǎng)基的 pH 值可能會有輕微變化（通常 ±0.2 范圍內(nèi)），屬于正常現(xiàn)象，不影響使用。
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