配置營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基時(shí)防止雜菌污染的核心原則與具體措施！
小楊 / 2025-09-10 09:18:48
百歐博偉生物：在配置
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的過程中，雜菌污染會(huì)直接導(dǎo)致培養(yǎng)基失效，影響后續(xù)微生物檢測結(jié)果。防止污染需從原料處理、操作環(huán)境、器具滅菌、操作規(guī)范等多個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制，具體措施如下：
一、原料與試劑的預(yù)處理
1、選擇無菌 / 低菌原料：
蛋白胨、牛肉膏、瓊脂等基礎(chǔ)成分應(yīng)選擇正規(guī)廠家產(chǎn)品，確保純度高、雜菌少（劣質(zhì)原料可能攜帶大量雜菌，增加污染風(fēng)險(xiǎn)）。
蒸餾水或去離子水需符合實(shí)驗(yàn)要求，避免使用未經(jīng)處理的自來水（含大量微生物）。
2、原料溶解時(shí)避免污染：
稱量原料時(shí)，使用潔凈的稱量工具（如滅菌后的藥匙），避免手直接接觸；稱量紙一次性使用，防止交叉污染。
溶解過程中，容器（如燒杯、錐形瓶）需提前清洗干凈（無殘留有機(jī)物或洗滌劑），必要時(shí)先用蒸餾水沖洗 2-3 次。
二、器具的徹底滅菌
1、容器與工具滅菌：
錐形瓶、試管、培養(yǎng)皿、移液管等直接接觸培養(yǎng)基的器具，需經(jīng)干熱滅菌（160-170℃，2-3 小時(shí)）或高壓蒸汽滅菌（121℃，20 分鐘），確保無菌。
玻璃器皿滅菌前需徹底清洗，去除油污和雜質(zhì)（殘留物質(zhì)可能影響滅菌效果或細(xì)菌生長）。
2、滅菌后器具的保存：
滅菌后的培養(yǎng)皿、移液管等需密封保存（如放入無菌包裝袋或滅菌盒），避免暴露在空氣中被污染；使用前在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開。
三、配置過程的無菌操作
1、操作環(huán)境控制：
培養(yǎng)基配置（尤其是溶解后、滅菌前的分裝，以及滅菌后倒平板等步驟）需在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，操作前 30 分鐘開啟紫外燈消毒，關(guān)閉紫外燈后通風(fēng) 10 分鐘再操作。
工作臺(tái)面用 75% 酒精擦拭消毒，操作人員需穿無菌實(shí)驗(yàn)服、戴口罩和手套，避免呼吸或手部細(xì)菌污染。
2、分裝與滅菌的銜接：
培養(yǎng)基溶解并調(diào) pH 后，需立即分裝到滅菌后的容器中，盡量縮短暴露時(shí)間；分裝時(shí)瓶口靠近容器口，避免液體濺出污染瓶口。
分裝后及時(shí)加蓋（錐形瓶用棉塞 + 牛皮紙包扎，試管用硅膠塞或棉塞），防止滅菌前空氣污染。
四、滅菌過程的嚴(yán)格把控
1、確保滅菌徹底：
采用高壓蒸汽滅菌（121℃，103.4kPa，20 分鐘），滅菌前需徹底排出滅菌鍋內(nèi)冷空氣（冷空氣殘留會(huì)導(dǎo)致溫度不達(dá)設(shè)定值，滅菌不徹底）。
滅菌時(shí)間和溫度需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行：時(shí)間不足會(huì)導(dǎo)致雜菌存活，時(shí)間過長或溫度過高可能破壞營養(yǎng)成分，但不會(huì)直接導(dǎo)致污染。
2、滅菌后處理：
滅菌結(jié)束后，待壓力降至 0 時(shí)再打開排氣閥，避免壓力驟降導(dǎo)致培養(yǎng)基沖出容器造成污染。
滅菌后的培養(yǎng)基需在超凈工作臺(tái)內(nèi)冷卻（倒平板時(shí)冷卻至 50-60℃），避免在開放環(huán)境中長時(shí)間放置。
五、倒平板與保存的注意事項(xiàng)
1、倒平板的無菌操作：
倒平板時(shí)，培養(yǎng)皿需在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開，皿蓋僅打開一條縫隙（避免完全暴露），瓶口灼燒滅菌（用酒精燈外焰快速燎烤瓶口 1-2 秒，殺滅瓶口雜菌）后再傾倒培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基倒入后，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使液面均勻，避免產(chǎn)生氣泡；若有氣泡，可用無菌吸管輕輕刺破。
2、凝固與保存：
倒好的平板需在超凈工作臺(tái)內(nèi)水平放置至完全凝固（約 30 分鐘），避免移動(dòng)導(dǎo)致表面污染。
凝固后的平板需倒置（防止皿蓋冷凝水滴落污染菌落），4℃冰箱密封保存（用保鮮袋包裹），保存時(shí)間不超過 2 周（避免干燥或污染）。
六、事后質(zhì)量驗(yàn)證
無菌檢驗(yàn)：每批次培養(yǎng)基制備后，隨機(jī)抽取 1-2 個(gè)平板，37℃培養(yǎng) 24-48 小時(shí)，若無菌落生長，說明無雜菌污染；若有菌落，需排查污染環(huán)節(jié)并重新制備。
通過以上措施，可從源頭切斷雜菌污染的途徑，確保
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的無菌性，為后續(xù)微生物培養(yǎng)提供可靠的基礎(chǔ)。核心原則是：全程保持無菌意識(shí)，嚴(yán)格控制操作環(huán)境和器具滅菌，避免任何可能引入雜菌的環(huán)節(jié)。
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